精子优化处理后顶体酶活性与ivf受精率相关性的研究

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1、精子优化处理后顶体酶活性与IVF受精率相关性的研宄耿岚1李蓉1罗永胜2郝桂琴1王勇1钱卫平1（通讯作者）（1北京大学深圳医院生殖医学科广东深圳518036）（2深圳市福田区第二人民医院内科广东深圳518049）【中图分类号】R698【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）50-0145-02【摘要】目的探讨精子优化后顶体酶活性变化与体外受精（IVF）受精率的关系。方法釆用分光光度比色法，对接受IVF治疗的93例不育夫妇男方精液，测定优选处理前精子顶体酶活性，分析其与IVF受精率的相关性。结果优选前的精子顶体酶活性与IVF受精率无明显相关性，单纯精子顶体酶活性

2、降低并不影响IVF受精率。结论精子顶体酶活性与IVF受精率无明显相关性，通过精子优化处理后，可以预测IVF受精率。【关键词】优化顶体酶活性IVF受精率不育症涉及男女双方多种因素和多个环节，其中，男性不育约占不育症的50%［1］，而男性不育多数是由精子功能障碍引起。顶体酶是精子顶体内一种特殊的丝氨酸蛋白溶解酶，在精子穿透卵母细胞透明带时起溶解透明带作用，因而其活性高低可直接影响精子穿透卵母细胞透明带和精卵结合［2,3］。木研究拟对常规IVF治疗中经密度梯度离心优选处理前和处理后的精子顶体酶活性的改变进行研究并与IVF受精率联系，以期发现精子顶体酶活性与IVF受精率的相关性，为临

3、床选择常规IVF还是ICSI治疗提供参考。以探讨精子顶体酶活力测定在男性不育症辅助诊断中的意义。1资料和方法1.1一般资料研究对象选自2008年4-2012年3月间在北京大学深圳医院生殖科就诊，并选择常规IVF治疗的93例不育夫妇，女方年龄26〜42岁，平均年龄34岁；男方年龄25〜56岁，平均年龄37岁；不育年限2〜10年。93例不育夫妇中，男方精液均达到IVF标准且均可采用分光光度比色法在半年内检测至少2次精子顶体酶活性即：精子计数>10×106/ml:精子前向活动率>30%。1.2检测方法1.2.1精液的收集及顶体酶活性的检测男方在取精前禁欲2〜

4、7d，精液取出后装入无菌无毒取精杯中，置于25°C恒温室，待其自然液化后充分混匀计数，然后采用分光光度比色法检测精子顶体酶活性。分光光度计读取吸光度值，正常参考值为48.2-218.7υIU/l06精子。1.2.2精子顶体酶活性定量检测根据改良Kennedy法定量检测精子顶体酶活性（深圳华康生物医学工程有限公司生产的试剂盒），具体为：（1）每份标本同吋设测定管和空白管，每管参加反应的精子数为7.5×106个，2000g离心20min;（2）倾倒弃去精浆，加入抑制剂，去除精浆蛋白酶抑制因子；（3）于测定管和对照管各加入反应液，然后在对照管中加入终止液

5、，24°C准确孵育lh，反应液中包含BAPNA底物和pH8.0缓冲液，在pH8.0的缓冲液中测定管内的前顶体素活化为顶体酶，水解BAPNA底物，分解产生有色产物硝酰基苯胺；（4）lh后在测定管中加入终止液，终止反应后，将测定管和对照管2000g离心15min，上清液移入0.5cm比色皿，410nm波长比色，蒸馏水调零，读取各管OD值。根据公式：顶体酶活性=（测定管OD值-对照管OD值）×10/247.5×7.5,计算每106精子的总项体酶活性。1.2.3梯度离心法优化处理精液新鲜液化精液采梯度离心法洗涤，具体为：取无菌无毒试管，加入2ml40%Pure

6、sperm,然后于其下方缓慢加入2ml80%Puresperm，制备好双层密度梯度；在制备好的密度梯度上加入液化精液，离心20min去上清，将沉淀吸到含1006培养液的离心管中，离心2000rp×10min;再次去上清，将沉淀吸到含10%人血白蛋白的1020培养液的离心管中，离心2000rp×10min;上游调整精子密度，备用。1.2.4具体试验步骤93例不育夫妇女方全部采用GnRH/FSH/HCG长方案，于月经周期第3天采用GnRH-a降调节，根据患者年龄、既往治疗史、性激素水平以及B超监测窦卵泡数选择适当剂量的FSH促排卵，并依据阴道B超、血清雌激

7、素测定、连续尿LH监测，当至少有3个卵泡的平均直径〉16mm或两个卵泡平均直径〉18mm时,适吋注射HCG5000IU或10000IU,注射HCG后36h经阴道超声显像引导下穿刺卵泡取卵。解剖显微镜下寻找卵-冠-丘复合物（OCCC）,并估计卵子成熟度，冋收到2个和2个以上卵子并II成熟卵子比例超过50%者包含于该研究中。取卵日收集精液标本，采用梯度离心法和上游法优化处理、制备精滴，用于加入卵子，适吋观察卵子受精率。卵子的受精率是以出现2个原核的卵子占所奋成熟卵子的比例来计数。2结果2.1优选处理对精子顶