精子顶体酶活性与顶体图像定量的相关性研究

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1、精子顶体酶活性与顶体图像定量的相关性研究吴励梅1李林1曹航1黎运西1唐跃华2(1南方医科大学附属顺德第一人民医院生殖健康与不孕科广东顺德528300)(2惠州市第三人民医院医学检验中心广东惠州516000)【中图分类号】R321.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2012)49-0183-02【摘要】目的探讨精子顶体酶活性与精子头部顶体面积、灰度值之间的相关性。方法用改良Kennedy法测定精子顶体酶活性，采用图像定量分析软件ScoionImage测量以改良巴氏染色法染色的精子头部顶体面积及灰度值。结果顶

2、体酶活性与灰度值之间存在相关性(P<0.05),顶体酶活性与顶体面积不相关(P>；0.05)o结论精子顶体图像定量分析结合顶体酶活性，在男性不育症因素分析中可提高参考价值。【关健词】精子顶体酶顶体面积灰度值近年来，精子顶体酶活性被认为是衡量男性生育力很有价值的指标之一。精子形态异常导致精子顶体酶活性降低，可能是畸形精子症、弱精症和少精子症患者不育的原因之一⑴2］。由于顶体酶仅存在于精子头部顶体内，顶体面积及灰度值与顶体酶之间是否相关是值得关注的问题，国内也少见报道。木文研究了100例势性不育患者的精子顶体酶活性

3、与顶体面积、灰度值的相关性，旨在为临床评价另性牛育力提供更客观的实验依据，现将结果报道如下。1资料与方法1.1一般资料100例样木来自2011年4月〜2012年3月来我院生殖健康与不孕科就诊的势性不育患者，年龄22〜49岁，平均30.93岁，身体健康，婚后正常性牛活1年以上不育，无外伤及遗传性疾病家族史,无性功能障碍病史，排除患者有牛殖系统感染及明显牛殖系统疾病。剔除液化不良、少精、形态学无顶体畸形精子的标木。1.2标木的采集受试者禁欲3・7天后手淫取全部精液于洁净无菌的一次性采精杯内，置37°C水浴箱内，待其完全液化后

4、进行检测。1.3顶体酶活性测定采用改良Kennedy法测定精子顶体酶活性，试剂盒购自深圳华康生物学工程有限公司。1.4顶体图像分析形态学片采用改良巴氏染色，精子核着色较深，呈现深蓝色，顶体区域着色较浅，空泡不着色。把经过染色的涂片置于显微镜下，用×100油镜观察，计算机图像采集系统摄像，再利用专业图像定量分析软件ScionImage测量精子头部顶体面积(减去空泡面积)及灰度值(在顶体区域的顶、底、左、右、中部各取一点测灰度值，求得均数，并且剔除背景灰度值)。测得的顶体面积以像素值计量。1.5仪器设备上海科华S

5、T-360酶标仪、eppendorf高速离心机、计算机图像采集系统。1.6统计分析采用SPSS13.0统计软件,计量资料以(x-±s)表示，以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1顶体酶活性与灰度值呈显著正相关(r=0.309,P<0.05)o见表例数(N)均值±标准差r值P值顶体酶活性(ulU/106精子)10091.35±54.710.3090.002灰度值10034.95±5.742.2顶体酶活性与顶体面积不相关(r=0.094,P>0

6、.05)。见表2。例数(N)均值±标准差r值P值顶体酶活性(ulU/106精子)10091.35±54.710.0940.351顶体面积(平方像素)100310.06±76.733讨论正常形态精子的顶体结构表现为完整的双层膜性结构，呈平行贴于核表面。顶体内含有多种水解蛋白酶，精子顶体酶以-•种胰蛋白酶原形式合成并储存在顶体内，当精子与卵子相遇发生顶体反应吋，精子顶体膜与质膜融合并发生变化，膜通透性增加，顶体酶原释放并活化为顶体酶，溶解卵子外围的放射冠和透明带，形成一条通道以利于精

7、子与卵子结合，完成受精过程。精子顶体酶活性低下或顶体形态异常会影响卵丘的分解及对透明带的穿透［3］。只有顶体完整的精子才能与透明带结合［4］。精子顶体的完整性能反映精子顶体酶含量的多少，因为顶体不完整的精子顶体酶会漏岀［5］。顶体不完整常有以下情况：顶体缺乏、顶体薄、体积小、泡状顶体、无内容物或电子密度低等。这些类型的精子顶体酶缺失或活性降低，精子不能穿透放射冠和透明带，受精率降低⑹。顶体内容物呈中等致密，均质性，经改良巴氏染色后，顶体区域着色较浅呈淡蓝色，清晰可辨。颜色的深浅程度可用图像灰度值来表示。本研究结果显示，精

8、子顶体酶活性与头部顶体灰度值存在显著正相关(r二0・309,P<0.05),说明灰度值是顶体酶含量在形态学上的另一种表现形式，能反映精子顶体酶含量的多少。为了让测量结果更准确，涂片吋精子要分布均匀无重叠，染色后精子形态结构清晰，背景明净，否则要重新制片。有研究表明，精子头部犬小可影响自发性顶体反应发生，与小顶体