余甘子提取物体外抗单纯疱疹病毒1型和2型的初步研究.doc

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1、余甘子提取物体外抗单纯疱疹病毒1型和2型的初步研究作者：瞿畅，赖志才，裴赢，张美英，王一飞，张颖君，杨崇仁【摘要】目的从余甘子的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物3种提取物体外筛选抗单纯疱疹病毒1型和2型的活性成分。方法通过观察药物毒性、病毒引起的细胞病变效应、空斑减数法，判断药物的毒性及其抗病毒效应。结果余甘子的醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物对于单纯疱疹病毒1型的半数抑制浓度分别为，，Pg/ml;余甘子的3种提取物对于单纯疱疹病毒2型的半数抑制浓度分别为，，Ug/ml。结论余甘子3种提取物在体外对单纯疱疹病毒1型和2型均有一定的抑制作用。【关键词】

2、余甘子；单纯疱疹病毒1型；单纯疱疹病毒2型；细胞病变效应法；空斑减数法Abstract:ObjectiveTostudytheactivecomponentsofanti-HSV-landHSV-2ofcrudeextractfromPhyllanthusemblica.MethodsThetoxicandantivirouseffectswereevaluatedbyobservingtoxiceffect,cytopathiceffect(CPE)，MTTcolorimetricassayforvitalcellrate,plaquesreducti

3、onratio.Resultslnhibitiononherpessimplexviruswereobservedduringtheexperiment.TheIC50onHSV_lofaceticetherextract,methanolextract,aqueousextractfromPhyllanthusemblicawere,,Pg/ml；whiletheIC50onHSV-2oftheextractsabovewere"Pg/threeextractsfromPhyllanthusemblicacaninhibitbothofHSV-land

4、HSV-2invitro.Keywords:Phy11anthusemblica;HSV-1;HSV-2;CPE;Plaquesreductionratio单纯庖疹病毒(herpessimplexvirus)属于淹疹病毒科a病毒亚科，呈球形，完整病毒由核心、衣壳、被膜(Tegument)及囊膜组成。单纯疱疹病毒1型主要是通过呼吸道、皮肤和粘膜密切接触传播，感染腰以上部位的皮肤粘膜和器官；单纯疱疹病毒2型主要感染腰部以下粘膜，是引起生殖器发炎和疱疹的罪魁祸首。对于疱疹病毒的感染，临床主要使用阿昔洛韦、更昔洛韦等药物进行治疗。但此类药物的缺点是极易产生耐药的

5、现象，国内外许多实验室都已成功分离了阿昔洛韦的耐药株［1，2］。因此开发出新的抗病毒药物成为研究病毒药物的热点。我国是一个中药资源很丰富的国家，本课题的研究目的就是从已经证明有抗病毒活性的南药中筛选出具有抗病毒的活性成分，并且在前期的研究中也有了一些发现［36］。余甘子为大戟科叶下珠属植物余甘子的果实，又称庵摩勒、油柑子、滇橄榄。余甘子味甘、微涩，性凉，有清热利咽、润肺止咳的功用，其药用价值早在我国古代药膳《异物志》《唐本草》《本草拾遗》及《本草纲目》中就有论述。余甘子在临床上主要用于感冒发热、咽喉痛、咳嗽、口干、烦渴、牙痛、维生素C缺乏症。本研究探讨余

6、甘子对两种单纯疱疹病毒的作用。1材料仪器药物余甘子晾干果实的3种提取物均由中国科学院昆明植物研究所提供。提取方法：植物样品（100g），粉碎，醋酸乙酯提取，甲醇提取，热水提取，依次得到醋酸乙酯提取物、甲醇提取物和水提物。醋酸乙酯提取物、甲醇提取物用二甲基亚讽（DMSO）溶解至lmg/ml,水提物用水溶解至lmg/ml，高压灭菌待用。细胞株和病毒株非洲绿猴肾细胞（以下称Vero细胞）购于美国ATCC公司，由本室保存。细胞生长液为含10%胎牛血清的DMEM，细胞维持液为含2%新生牛血清的DMEM，常规加入青霉素100M•ml-1,链霉素100M•ml-1。V

7、ero细胞用生长液连续传代3次保持对数生长期供实验用。单纯疱疹病毒1型（以下称HSV-1）毒株F株和单纯疱疹病毒2型（以下称HSV-2）毒株HSV-2333由武汉大学医学院病毒研究所提供。HSV-1和HSV-2的宿主细胞均为Vero细胞。器材和试剂5%C02细胞培养箱，德国HERAEMS公司产品；超净工作台，苏州净化设备公司产；进口96孔培养板（平底)和进口24孔培养板(平底)，美国CORNING公司产；倒置显微镜，德国LAICA公司产；培养基为DMEM，GIBCOBRL公司产，除菌过滤后用碳酸氢钠调pH至；胎牛血清、新生牛血清，杭州四季青，经56QC3

8、0min灭活补体，除菌分装；消化液为5%胰蛋白酶5ml+5%EDTA2ml+0.