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《芪倍液体外抗ⅱ型单纯疱疹病毒的实验研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、芪倍液体外抗Ⅱ型单纯疱疹病毒的实验研究【摘要】目的研究芪倍液体外抗Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)的作用机理。方法利用体外细胞培养技术,采用微量细胞病变抑制法来研究中药各浓度组的抑制病毒增殖作用、直接杀伤病毒作用,以病毒滴度和抑制病毒指数为指标。结果①抑制病毒增殖实验：芪倍液1.63、0.81、0.41mg/mL浓度组的病毒滴度与病毒对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),抑病毒指数>2；②直接杀伤病毒实验：芪倍液1.63mg/mL-8h组、1.63mg/mL-24h组、0.81mg/mL-24h组的病毒滴度与病毒对照组比较,差异有统计学意
2、义(P<0.05),其余各组的病毒滴度与病毒对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论芪倍液具有抗Ⅱ型单纯疱疹病毒的作用。【关键词】宫颈糜烂；Ⅱ型单纯疱疹病毒；芪倍液；病毒滴度；抑制病毒指数Keyplexvirus-Ⅱ；LiqQibei；virustiter；virusinhibitionindex宫颈糜烂是慢性宫颈炎的一种主要病理变化,是妇产科常见病、多发病,其癌变率颇高。芪倍液在临床中以粉膜剂型用于治疗宫颈糜烂[1],经临床观察,疗效确切[2]。我们在临床研究的基础上,针对其病毒病因学说,利用体外细胞培养技术,采用微量细胞病变抑制法
3、[3],进行了芪倍液抗Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅱ)作用的实验研究。 1实验材料 1.1病毒 HSV-Ⅱ病毒株由武汉大学医学院病毒研究所馈赠。 1.2细胞 Vero细胞由武汉大学医学院病毒研究所提供,细胞传代及其悬液制备方法参见文献[4]。 1.3培养液及试剂Eagle培养液(G.M)：用于培养细胞。由DMEM(89mL)、胎牛血清(10mL)及卡拉霉素(10000U/mL,1mL)组成,用7.5%NaHCO3调pH至7.2,过滤除菌,4℃保存。Eagle维持液(M.M)：用于维持细胞及稀释药物和病毒。除胎牛血清含2%外,其余成分同G.M,用
4、7.5%NaHCO3调pH至7.2,过滤除菌,4℃保存。 1.4药物芪倍液：将黄芪、五倍子、儿茶、乳香、没药等按照一定的比例配伍,制成浓度为130g/100mL的中药原液,将其低速离心10min(1000r/min),去沉淀,取离心上清液,滤膜除菌过滤,然后用无菌Eagle维持液配成13mg/mL的中药干液,实验前用Eagle维持液倍比稀释干液,配成9个浓度组,经MTT比色分析筛选出对Vero细胞无毒性的0.11～1.63mg/mL的5个浓度组。 2实验方法 2.1抑制Ⅱ型单纯疱疹病毒增殖作用实验制备6块Vero细胞培养板,吸除各Vero细胞培养板上
5、的培养液上清,用Eagle维持液将HSV-Ⅱ病毒原液稀释成9个稀释度的病毒混合液,每块细菌培养板均接种9个稀释度的病毒混合液,每稀释度4孔,每孔50μL病毒混合液,每板均留4孔作正常细胞对照,病毒吸附1h后,弃上清液。 将各浓度组的药液分别加入其中5块已接种病毒的细胞培养板上,每孔100μL,每板1个浓度组,另用Eagle培养液取代药液,加入剩下的一块细胞培养板上作病毒对照组。将上述6块细胞培养板密封后置入37℃、5%CO2培养箱中培养3d,每天在倒置显微镜下观察特征性细胞病变效应(以下简称CPE),记录CPE程度,计算病毒TCID50滴度及抑制病毒指数
6、(抑病毒指数≥2则表明药物具有抗病毒作用,反之则无)[5],并确定药物的最小抑毒浓度(MIC)。 2.2细胞外直接杀伤病毒实验将各浓度组的药液分别与HSV-Ⅱ病毒原液在试管内等量混合,分别作用8h和24h,然后将中药病毒混合液用Eagle维持液作连续10倍稀释,稀释成9个稀释度。将已稀释各浓度组的中药病毒混合液接种到Vero细胞培养板上,每板1个浓度组,每个稀释度4孔,每板均留有4孔作正常细胞对照,覆盖1h后吸除上清,更换Eagle培养液取代药液作对照组,将上述各块细胞培养板密封后置入37℃、5%CO2培养箱中培养3d,如上法每天在倒置显微镜下观察,记录
7、CPE程度,计算病毒TCID50滴度。 2.3统计学方法 以上各实验重复3次,所得病毒滴度、抑制病毒指数等数据构成计量资料,采用F及q检验进行统计学分析处理。 3结果 3.1芪倍液对Ⅱ型单纯疱疹病毒增殖的抑制作用当药物浓度在0.41mg/mL以下各浓度组时,其病毒滴度与病毒对照组差异无统计学意义(P>0.05),其抑制病毒指数<2,说明其对HSV-Ⅱ病毒无抑制增殖作用；而药物浓度在0.41mg/mL及其以上各浓度组时,其病毒滴度与病毒对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01),其抑制病毒指数>2,说明其对HSV-Ⅱ病毒有抑
8、制增殖作用,药物的最小抑毒浓度为0.41mg/mL。结果见表1。表
