survivin、caspase

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1、Survivin、caspase【摘要】目的　探讨大肠癌伴血吸虫病中Survivin、Caspase-3、AKT1蛋白的表达及其意义。方法采用免疫组化技术检测40例大肠癌伴血吸虫病中Survivin、Caspase-3、AKT1蛋白的表达，并与35例不伴血吸虫病的大肠癌及40例正常结肠粘膜作对照。结果AKT1在大肠腺癌中的表达与正常大肠粘膜相比有显著意义(P<0.01)，在大肠腺癌中Survivin的阳性率与正常大肠粘膜相比，差异具有显著性意义(P<0.01)，caspase-3在大肠腺癌中的阳性表达率与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。A

2、KT1在大肠腺癌不伴血吸虫病、伴血吸虫病中阳性表达率分别为85.7%和82.5%，差异无统计学意义(P>0.05)。Survivin在大肠腺癌不伴血吸虫病、伴血吸虫病中表达率分别为91.4%，90.0%，差异无统计学意义(P>0.05)。caspase-3在大肠腺癌不伴血吸虫病、伴血吸虫病中表达率分别为57.1%，62.5%;差异无统计学意义(P>0.05)。结论在大肠癌变过程中起重要作用的三种基因(AKT1、Survivin、caspase)的改变与血吸虫病无明确关系，因此血吸虫病与大肠癌之间的关系还需进一步探讨。【关键词】大肠癌伴血吸虫病;凋亡抑

3、制因子;细胞周期调控　目前对大肠癌的发生、发展已进行多方面的研究,但大肠癌伴血吸虫病的相关研究报道不多。AKT1是细胞生存通路PI3K/AKT的关键分子，其持续活化与组织增殖密切相关，Survivin是迄今发现最强的凋亡抑制因子，具有抑制凋亡效应蛋白酶Caspase活性、参与细胞周期调控及调节细胞有丝分裂等多种生物学作用。细胞凋亡的异常与肿瘤发生发展密切相关,而Caspase-3在凋亡过程中起着重要的作用。为此,我们应用免疫组织化学方法检测大肠癌伴血吸虫病组织中AKT1、Surviving、Caspase-3蛋白的表达,以探讨血吸虫感染与大肠癌发生的关系。　　1材料与

4、方法　　1.1研究对象标本取自我院病理科2002年至2005年期间手术大肠腺癌标本75例,男性39例，女性36例，年龄36～79岁，平均48岁;年龄<60岁者36例，≥60岁者39例。肿瘤病理分级：高分化腺癌28例、中分化腺癌35例、低分化腺癌12例。其中40例大肠腺癌中见钙化血吸虫卵沉积。采用免疫组化技术检测40例大肠癌伴血吸虫病组织中Survivin、Caspase-3、AKT1蛋白的表达水平，并与35例不伴血吸虫病的大肠癌及40例正常结肠粘膜组织作对照(大肠粘膜伴/不伴血吸虫病各20例)。　　1.2研究方法标本均经10%的甲醛固定，常规石蜡包埋，切片厚4～

5、5um，载玻片经多聚赖氨酸处理，防止脱片。微波抗原修复。鼠抗人AKT1免疫组化单克隆抗体，兔抗人Survivin免疫组化多克隆抗体，鼠抗人caspase-3免疫组化单克隆抗体兔抗人，免疫组化试剂盒、DAB显色剂试剂盒均购自福州迈新公司。染色步骤按试剂盒说明书操作。PBS冲洗，DAB显色，苏木素复染，常规脱水透明，树胶封片。以PBS代替一抗作阴性对照。光镜下任取4个高倍视野进行细胞计数，至少计数200个细胞，AKT1阳性着色定位于细胞的胞质和(或)胞膜，呈淡黄～棕黄色细颗粒状，局灶或弥漫性分布。Survivin阳性着色主要定位于细胞的胞质和胞核上，呈淡黄～棕黄色细颗粒状

6、，阳性细胞呈局灶或弥漫性分布。caspase-3的阳性着色在细胞的胞质中，呈淡黄～棕黄色细颗粒状，局灶或弥漫性分布。采用半定量积分法[1-3]判定免疫组化染色结果：计算阳性细胞百分数并赋予分值，≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，﹥75%为4分;观察着色强度并赋予分值，无着色为0分，浅黄着色为1分，黄色为2分，棕黄着色为3分，两者相乘，0分为(-)，1～4分为(+)，5～8分为(++)，9～12分为(+++)。　　1.3统计学方法采用统计学软件SPSS13.0进行处理。AKT1、Survivin、caspase-3在大肠腺癌与

7、对照组间的表达差异用四格表的χ2检验，Spearman秩相关进行AKT1、Survivin、caspase-3间的相关性分析，P=0.05为检验水准，P<0.05差异有显著性意义，P<0.01差异有非常显著性意义。　　2结果　　2.1AKT1在大肠腺癌中的表达AKT1在正常大肠粘膜不伴血吸虫病、正常大肠粘膜伴血吸虫病、大肠腺癌不伴血吸虫病、大肠腺癌伴血吸虫病中表达率依次为15%，10%，85.7%和82.5%;其在大肠腺癌与正常大肠粘膜中的表达率相比，差异有非常显著性统计学意义(P<0.01)，但在大肠腺癌不伴血吸虫病与大肠腺癌伴血