一株猪流行性腹泻病毒（pedv)的鉴定及分离培养

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1、一株猪流行性腹泻病毒（PEDV）的鉴定及分离培养摘要猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一类急性、高度接触性传染病，主要临床症状为呕吐、腹泻、脱水性下痢。因PED对新生仔猪的高致死率，所以每次爆发都会对养猪业造成严重经济损失。我国是主要发病国之一，自2010年起该病的发病率明显升高，且规模更大。由于近年来猪流行性腹泻的频繁爆发，使其成为世界范围的猪传染病。2013年美国首次报道猪流行性腹泻案例，并且短时间内迅速扩散蔓延。同年，QiChen等成功分离出美国传播的一株PEDV流行毒株。本实验室近些年来致

2、力于PEDV减毒活疫苗的研究工作，已经取得了一定进展，相继得到了不同类型的重组PEDV,但尚未进行过PEDV流行毒株的分离培养。本实验尝试以Vero细胞分离出PEDV-GJL野毒株，为今后通过RNA定向重组构建PEDV重组病毒提供各大的研发空间。PEDV的主要致病蛋白是纤突蛋白（S蛋白），且编码纤突蛋白的S基因突变率较高，所以根据S基因的遗传变异关系可以一定程度上反应PEDV流行毒株的爆发时间与地区性。本研究首先进行临床样本中PEDV野毒株S基因全序列的扩增测序，然后借鉴QiChen等的培养方案，在病毒维持液中添加TPB、

3、酵母粉、5pg/pL胰酶，延长培养周期等，以期在Vero细胞上分离出PEDV-GJL野毒株。分离得到的毒株在Vero细胞上的CPE并非常见流行毒株的合胞体状态，而是类似DR13的病变形态。进一步做对比实验发现病毒的增殖不依赖外界胰酶的存在，初步怀疑是否是DR13毒株。经RT-PCR检测ORF3序列，发现分离到的是PEDV-GJL和DR13减毒疫苗株的混合毒株，并且病毒增殖传至第四代一株猪流行性腹泻病毒（PEDV）的鉴定及分离培养摘要猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一类急性、高度接触性传染病，主要

4、临床症状为呕吐、腹泻、脱水性下痢。因PED对新生仔猪的高致死率，所以每次爆发都会对养猪业造成严重经济损失。我国是主要发病国之一，自2010年起该病的发病率明显升高，且规模更大。由于近年来猪流行性腹泻的频繁爆发，使其成为世界范围的猪传染病。2013年美国首次报道猪流行性腹泻案例，并且短时间内迅速扩散蔓延。同年，QiChen等成功分离出美国传播的一株PEDV流行毒株。本实验室近些年来致力于PEDV减毒活疫苗的研究工作，已经取得了一定进展，相继得到了不同类型的重组PEDV,但尚未进行过PEDV流行毒株的分离培养。本实验尝试以Ve

5、ro细胞分离出PEDV-GJL野毒株，为今后通过RNA定向重组构建PEDV重组病毒提供各大的研发空间。PEDV的主要致病蛋白是纤突蛋白（S蛋白），且编码纤突蛋白的S基因突变率较高，所以根据S基因的遗传变异关系可以一定程度上反应PEDV流行毒株的爆发时间与地区性。本研究首先进行临床样本中PEDV野毒株S基因全序列的扩增测序，然后借鉴QiChen等的培养方案，在病毒维持液中添加TPB、酵母粉、5pg/pL胰酶，延长培养周期等，以期在Vero细胞上分离出PEDV-GJL野毒株。分离得到的毒株在Vero细胞上的CPE并非常见流行毒

6、株的合胞体状态，而是类似DR13的病变形态。进一步做对比实验发现病毒的增殖不依赖外界胰酶的存在，初步怀疑是否是DR13毒株。经RT-PCR检测ORF3序列，发现分离到的是PEDV-GJL和DR13减毒疫苗株的混合毒株，并且病毒增殖传至第四代一株猪流行性腹泻病毒（PEDV）的鉴定及分离培养摘要猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一类急性、高度接触性传染病，主要临床症状为呕吐、腹泻、脱水性下痢。因PED对新生仔猪的高致死率，所以每次爆发都会对养猪业造成严重经济损失。我国是主要发病国之一，自2010年起该

7、病的发病率明显升高，且规模更大。由于近年来猪流行性腹泻的频繁爆发，使其成为世界范围的猪传染病。2013年美国首次报道猪流行性腹泻案例，并且短时间内迅速扩散蔓延。同年，QiChen等成功分离出美国传播的一株PEDV流行毒株。本实验室近些年来致力于PEDV减毒活疫苗的研究工作，已经取得了一定进展，相继得到了不同类型的重组PEDV,但尚未进行过PEDV流行毒株的分离培养。本实验尝试以Vero细胞分离出PEDV-GJL野毒株，为今后通过RNA定向重组构建PEDV重组病毒提供各大的研发空间。PEDV的主要致病蛋白是纤突蛋白（S蛋白）

8、，且编码纤突蛋白的S基因突变率较高，所以根据S基因的遗传变异关系可以一定程度上反应PEDV流行毒株的爆发时间与地区性。本研究首先进行临床样本中PEDV野毒株S基因全序列的扩增测序，然后借鉴QiChen等的培养方案，在病毒维持液中添加TPB、酵母粉、5pg/pL胰酶，延长培养周期等，以期在Vero细胞上分