hplc测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量

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1、HPLC测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量作者：黄晓文，谢艳婷，冯嘉欣，谢銮凤【摘要】目的建立夏桑菊颗粒中蒙花苷的测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱：DiamonsilTMC18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相为甲醇四氢呋喃水(43∶5∶52),检测波长334nm，流速1.0mL·min-1，柱温30℃。结果蒙花苷在0.048～0.959μg范围内线形关系良好，r=0.9999，平均加样回收率为100.7%，RSD为0.86%（n=6）。结论所建立的方法准确，重现性好，灵敏度高,可用于该制剂的质

2、量控制。【关键词】夏桑菊颗粒；蒙花苷；高效液相色谱法　　夏桑菊颗粒收载于《卫生部药品标准》中药成方标准第15册,由夏枯草、野菊花、桑叶3味中药组成，具有清肝明目、疏风散热作用，用于治疗风热感冒、目赤头痛、头晕耳鸣、咽喉肿痛等症。野菊花是本制剂的主要成分之一，蒙花苷是野菊花的特征成分［1-2］，　　2.2色谱条件及系统适应性试验　　　　色谱柱：DiamonsilTMC18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相∶甲醇四氢呋喃水(体积比43∶5∶52)；流速：1.0mL·min-1；检测波长334nm；柱温为3

3、0℃。分别取蒙花苷对照品溶液、供试品溶液和野菊花阴性对照溶液各20μL，按上述色谱条件，注入色谱仪。蒙花苷与样品中相邻色谱峰的分离度大于2.0,理论板数以蒙花苷计算应不低于2500,阴性对照没有干扰。蒙花苷对照品、供试品溶液及阴性对照溶液的色谱图见图1、2、3。　　2.3方法学考察　　2.3.1线性关系考察　　精密吸取0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL的蒙花苷对照品贮备液，置10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得质量浓度分别为2.40、4.80、9.59、19.18、28.77、38.36、47.

4、95μg·mL-1的系列对照品溶液。吸取上述系列对照品溶液各20μL，分别进样测定，以峰面积（A）对溶液的质量浓度（ρ）进行回归，得回归方程A=43690ρ-5780，r=0.9999，表明蒙花苷在0.048～0.959μg之间与峰面积线性关系良好。　　2.3.2精密度试验　　取蒙花苷对照溶液20μL，注入色谱仪，连续测定6次，记录峰面积，结果蒙花苷峰面积的平均值为607366，RSD为0.40%,表明仪器精密度良好。　　2.3.3重复性试验　　取同一批号（批号DA11008）的样品6份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶

5、液，进样测定，6次测定结果的RSD为1.44%，表明本方法重复性好。　　2.3.4稳定性试验　　取同一供试品溶液（批号DA11008），分别在0、2、4、8、12、24h进样20μL，结果峰面积RSD为0.82%，表明供试品溶液在24h内稳定。　　2.3.5加样回收试验　　取已知含量（批号DA11008）的样品粉末约2.5g，共6份，分别精密加入蒙花苷对照品贮备液（质量浓度为47.95μg·mL-1）4.2mL，按“2.1.2”项下方法制备溶液，按上述色谱条件下进样20μL,测定，结果蒙花苷平均回收率为100.7%，RSD为

6、0.86%，结果表明本方法准确可靠。结果见表1。表1蒙花苷回收率试验结果（略）　　2.4样品测定　　取夏桑菊颗粒样品3批，照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液。取蒙花苷对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入色谱仪，测定，计算蒙花苷的含量。结果3批样品（批号DA11008、DA10788、DA10963）所测得的含量分别为0.929、0.897、0.706mg.袋-1，RSD分别为0.5%、1.3%和1.1%（n=3）。　　3讨论　　3.1蒙花苷提取方法的选择分别考察了正丁醇萃取、甲醇回流、甲醇超声处理60min等提取方法的

7、提取效率，结果测得供试品（批号DA11008）中蒙花苷的含量分别为0.929、0.856、0.914mg·袋-1，表明用正丁醇萃取时含量最高，且其他成分的干扰少,蒙花苷与其他成分完全分离。同时考察了正丁醇萃取的次数，分别将每次提取的正丁醇液蒸干后用甲醇定容至25mL，进样测定，萃取1～4次制得的供试品溶液中蒙花苷的含量分别为353.4、52.9、8.6μg和未检出；考察了以正丁醇提取以正丁醇饱和的水洗涤液的次数，结果提取1～2次的供试品溶液中蒙花苷的含量分别为3.5μg和未检出，故采用本方法制备供试品溶液。　　3.2关于检测

8、波长的选择采用SPDM10A二极管阵列检测器,对蒙花苷对照溶液和供试品溶液，在200～600nm波长处进行扫描，结果在波长为334nm处有最大吸收，其他成分没有干扰，故选择334nm作为检测波长。见图4、图5。　　3.3流动相的选择曾参考