hplc测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量论文

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1、HPLC测定夏桑菊颗粒中蒙花苷的含量论文黄晓文，谢艳婷，冯嘉欣，谢銮凤【摘要】目的建立夏桑菊颗粒中蒙花苷的测定方法。方法采用反相高效液相色谱法，色谱柱：DiamonsilTMC18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相为甲醇四氢呋喃水(43∶5∶52),检测波长334nm，流速1.0mL·min-1.freelg，置100mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为47.95μg·mL-1的蒙花苷对照品贮备液。精密量取3.0mL，置10mL容量瓶，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得（质量浓

2、度为14.39μg·mL-1）。2.1.2供试品溶液取装量差异项下的本品，研细，取5g，精密称定，加水45mL使溶解，用以水饱和的正丁醇提取3次，每次正丁醇的用量分别为25、20、20mL，合并正丁醇液；用以正丁醇饱和的水20mL洗涤，洗涤后的水层用以水饱和的20mL正丁醇提取,合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。2.1.3阴性对照液取处方中除野菊花外的其余成分制成不含野菊花的阴性对照品，按“2.1.2”项下的方法制备野菊花阴性对照溶液。2.2

3、色谱条件及系统适应性试验色谱柱：DiamonsilTMC18柱（250mm×4.6mm，5μm，迪马公司）；流动相∶甲醇四氢呋喃水(体积比43∶5∶52)；流速：1.0mL·min-1；检测波长334nm；柱温为30℃。分别取蒙花苷对照品溶液、供试品溶液和野菊花阴性对照溶液各20μL，按上述色谱条件，注入色谱仪。蒙花苷与样品中相邻色谱峰的分离度大于2.0,理论板数以蒙花苷计算应不低于2500,阴性对照没有干扰。蒙花苷对照品、供试品溶液及阴性对照溶液的色谱图见图1、2、3。2.3方法学考察2.3.1线性关系考察精

4、密吸取0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL的蒙花苷对照品贮备液，置10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得质量浓度分别为2.40、4.80、9.59、19.18、28.77、38.36、47.95μg·mL-1的系列对照品溶液。吸取上述系列对照品溶液各20μL，分别进样测定，以峰面积（A）对溶液的质量浓度（ρ）进行回归，得回归方程A=43690ρ-5780，r=0.9999，表明蒙花苷在0.048～0.959μg之间与峰面积线性关系良好。2.3.2精密度试验取蒙花苷对照溶液20μL，注入色谱

5、仪，连续测定6次，记录峰面积，结果蒙花苷峰面积的平均值为607366，RSD为0.40%,表明仪器精密度良好。2.3.3重复性试验取同一批号（批号DA11008）的样品6份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，6次测定结果的RSD为1.44%，表明本方法重复性好。2.3.4稳定性试验取同一供试品溶液（批号DA11008），分别在0、2、4、8、12、24h进样20μL，结果峰面积RSD为0.82%，表明供试品溶液在24h内稳定。2.3.5加样回收试验取已知含量（批号DA11008）的样品粉末约2.5g

6、，共6份，分别精密加入蒙花苷对照品贮备液（质量浓度为47.95μg·mL-1）4.2mL，按“2.1.2”项下方法制备溶液，按上述色谱条件下进样20μL,测定，结果蒙花苷平均回收率为100.7%，RSD为0.86%，结果表明本方法准确可靠。结果见表1。表1蒙花苷回收率试验结果（略）2.4样品测定取夏桑菊颗粒样品3批，照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液。取蒙花苷对照品溶液与供试品溶液各20μL，注入色谱仪，测定，计算蒙花苷的含量。结果3批样品（批号DA11008、DA10788、DA10963）所测得的含量分别为

7、0.929、0.897、0.706mg.袋-1，RSD分别为0.5%、1.3%和1.1%（n=3）。3讨论3.1蒙花苷提取方法的选择分别考察了正丁醇萃取、甲醇回流、甲醇超声处理60min等提取方法的提取效率，结果测得供试品（批号DA11008）中蒙花苷的含量分别为0.929、0.856、0.914mg·袋-1，表明用正丁醇萃取时含量最高，且其他成分的干扰少,蒙花苷与其他成分完全分离。同时考察了正丁醇萃取的次数，分别将每次提取的正丁醇液蒸干后用甲醇定容至25mL，进样测定，萃取1～4次制得的供试品溶液中蒙花苷的含量分

8、别为353.4、52.9、8.6μg和未检出；考察了以正丁醇提取以正丁醇饱和的水洗涤液的次数，结果提取1～2次的供试品溶液中蒙花苷的含量分别为3.5μg和未检出，故采用本方法制备供试品溶液。3.2关于检测波长的选择采用SPDM10A二极管阵列检测器,对蒙花苷对照溶液和供试品溶液，在200～600nm波长处进行扫描，结果在波长为334nm处有最大吸收，其他成