尿液蛋白质定量测定方法及临床意义论文

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时间:2018-11-18

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1、尿液蛋白质定量测定方法及临床意义论文【摘要】正常人尿液中含有微量的蛋白质,每天排出量在150mg以下,其中以白蛋白占多数,随不同病种有一定量的球蛋白和其它蛋白。随着肾病科研工作的开展,以观察患者每天排出蛋白质的量以示病情的变化,因此尿液蛋白质定量在临床上有实际应用价值,已成为医院化验室常规的检验项目。【关键词】尿液蛋白质检测1丽春红-S法尿液标本中的蛋白质与丽春红-S染料混匀后一起被三氯醋酸沉淀,将沉淀物溶解于碱性溶液中,此时溶液呈紫色,显色深度与蛋白质浓度成正比。1.1试剂三氯乙酸-丽春红-S试剂原液:称取丽春红-S1.0g,加入

2、到1000ml300g/L三氯乙酸中溶解。三氯乙酸-丽春红-S试剂应用液:将原液用蒸馏水按1:10稀释,放置室温稳定数月。蛋白定性试剂。0.2mol/L氢氧化钠溶液。蛋白标准曲线:把定值蛋白稀释成不同的浓度,按操作测定其吸光度,以吸光度为横坐标.freell三氯乙酸一丽春红-S应用液,混匀后以3000r/min离心15分钟,吸去上清液,倒置于洁净滤纸上。在沉淀中加入0.2mol/L氢氧化钠溶液lml,用560nm波长测定其吸光度,查标准曲线的蛋白含量。1.3参考值46.5±18.1mg/L1.4注意事项:尿液如被稀释应乘以稀释倍数。

3、尿中血红蛋白含量5mg/L时影响结果。离心后上清必须全部弃去,若沉淀中夹带有丽春红-S影响比色结果。2双缩脲比色法以磷钨酸乙醇溶液沉淀尿中的蛋白质,在碱性介质中蛋白质与铜离子形成紫红色络合物,与标准液比色即可得出尿中蛋白质的含量。2.1试剂蛋白沉淀液:称取磷钨酸7.5g,加入30ml蒸馏水、95%乙醇385ml、浓盐酸25ml。双缩脲液:(1)称取枸橼酸钠34.6g,无水碳酸钠20g,加入120ml蒸馏水使其溶解;(2)称取硫酸铜3.46g,加入20ml蒸馏水使其溶解。将(1)、(2)混合,加入蒸馏水至200ml,备用。0.75mo

4、l/L氢氧化钠溶液。蛋白标准液(1.5g/L):称取150mg结晶型冻干人血清白蛋白,加入100ml的3g/L苯甲酸溶液溶解。2.2操作取5ml24小时混合尿液,2500~3000r/min离心5分钟,取上清备检。混匀放入56℃水浴15分钟,取出后离心,倾上清留沉淀。0.75mol/1NaOH1.51.51.5双缩脲液0.10.10.1各管混匀置室温10分钟,在540nm波长,以空白管调“0”比色。2.3结果计算尿蛋白含量(g/L)=测定管吸光度÷标准管吸光度×1.52.4参考值150mg/24h尿、2.5注意事项:记录24小时尿量

5、,将尿液混合后再离心。先做尿标本蛋白定性试验,若为阳性再做本试验。尿蛋白浓度较高时应稀释标本再操作。若疑有药物干扰时,可将尿蛋白沉淀物用无水乙醇洗涤3次再操作。3考马斯亮蓝法在酸性介质中考马斯亮蓝与尿液中的蛋白质NH3+基团结合,发生由棕色到蓝色的颜色变化,光谱吸收峰由465nm移至595nm。与标准液相比即可测出尿蛋白质含量。3.1试剂考马斯亮蓝溶液:(1)称取75mg考马斯亮蓝G-250溶于40ml甲醇中;(2)加入蒸馏水800ml、85%的浓硫酸100ml、浓盐酸5ml;(3)称取30mg十二烷基磺酸钠,溶于(2)中;(4)加

6、蒸馏水至1000ml,用滤纸过滤至棕色瓶中,室温保存。蛋白标准液(1g/L)以3g/L苯甲酸溶液稀释蛋白质标准。3.2操作留取24小时尿标本混匀,取5ml尿液离心后取上清备检。室温放置5分钟,以空白管调“0”,波长600nm读取光密度。3.3结果计算尿蛋白质含量(g/L)=测定管吸光度÷标准管吸光度×1.03.4参考值(20.6~172.6)mg/24h3.5注意事项:考马斯亮蓝溶液要定期新鲜配制,过滤后才可使用。测定标本时应同时测定蛋白质标准管。尿中的水杨酸类药物、麝香草酚和去污剂等可产生颜色干扰。尿标本蛋白质定性试验在(+++)

7、以上需稀释后测定。4微量蛋白检验尿液微量蛋白包括纤维蛋白降解产物、尿α1微球蛋白、尿α2微球蛋白、微量白蛋白等。4.1纤维蛋白降解产物(fibrinogendegradationproducts,FDP)FDP是纤维蛋白(原)经纤溶酶作用降解的产物。其检测现多用免疫学方法:免疫胶乳凝集法和ELISA法。正常人尿液无FDP。当肾脏及尿路局部炎症时,其渗出的少量纤维蛋白经纤维蛋白溶解酶降解,产生FDP。当肾小球病变至肾小球滤过膜通透性增高时,FDP碎片排于尿中。血液FDP增高时,尿液FDP排泄也增多。4.2α1-微球蛋白α1-微球蛋白(

8、α1-microglobulin,α1-M)是一种小分子量糖蛋白,由肝脏与淋巴细胞合成,广泛存在于体液及淋巴细胞膜表面。血液中存在两种形式的α1-M,一种为游离形式,另一种为与IgA结合形式。前者易被肾小球滤过,几乎全部被肾小管重吸收

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