不同针刺量对大鼠脑缺血后突触可塑性的影响

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1、不同针刺量对大鼠脑缺血后突触可塑性的影响作者：徐振华，许能贵，易玮，符文彬，靳瑞【摘要】【目的】观察不同针刺量对脑缺血后海马齿状回（DG）突触可塑性的影响。【方法】选用g/L水合氯醛溶液，按400mg/kg腹腔注射麻醉，然后取右上侧卧位固定，沿耳—眼连续中点切开皮肤，分离颞肌，暴露颞骨作一骨窗，轻抬脑，显露大脑中动脉，用烧红的电热灼器轻触大脑中动脉，使之凝闭，复制局灶性脑缺血模型。其中假手术组手术时只暴露大鼠大脑中动脉，不予凝闭。治疗组立即给予电针治疗。14治疗方法141穴位选择穴位选取督脉经穴“百会”、“大椎”，其定位参照大鼠的常用针灸穴位［7］：“百会”穴位于顶骨正中；“大

2、椎”穴在第7颈椎与第1胸椎间，背部正中。142刺法治疗1组大鼠以30号1寸毫针斜刺入百会05寸，直刺入大椎05寸，将针柄分别连接至电针仪上，5~10Hz，疏密波，强度以大鼠安静耐受为度，一般3~5V，时间30min，每天1次，均在上午10点左右进行，治疗2组于每天下午3时左右再治疗1次，参数同前，均连续治疗2周。而假手术组和缺血模型组大鼠只在同等条件下饲养，未予任何处理。15神经功能缺损评分（sNS)待大鼠苏醒后（术后3h)及2周后分别观察大鼠行为表现并进行神经功能缺损评分。方法：温和地提起动物尾巴，悬于地面上方1m高处；置于地面，轻轻侧推其肩胛部，参照Bederson等［

3、8］的评分方法行神经检查等级评分，评估大脑中动脉阻断后大鼠的神经损伤状况，3h时段缺血模型组与治疗组评分1分以下者剔除，不作为观察对象。评分标准：0分为向地面伸展两前肢，未见行为异常；1分为脑损伤对侧前肢持续地屈曲；2分为脑损伤对侧前肢屈曲，脑损伤对侧肩内收但无扭转，侧推抵抗力弱；3分为脑损伤对侧前肢屈曲，脑损伤对侧肩内收有扭转，侧推无抵抗力。16麻醉、固定和手术造模14d后，大鼠以100g/L乌拉坦溶液（18g/kg腹腔注射)麻醉，药量不够可酌情补加10%。将麻醉后的大鼠固定在立体定位仪上，固定耳杆和上门齿，调整动物向上倾约18°~22°，此角度每次实验都需要重新测定，以确保电

4、极是垂直插入。在缺血同侧用剪刀小心剪开皮肤，暴露头骨，在电极要插入部分标记并打孔，孔径25mm×25mm，分别去除碎骨片、硬脑膜和软脑膜，暴露皮层，并滴入生理盐水和石蜡油（以使皮层在实验过程中保持湿润）。体温维持仪测定动物体温，在实验过程中维持体温在（37±1）℃，心电经前放大器放大后，在示波器上显示。17刺激和记录刺激电极为双极电极，用两根彼此接近但又相互绝缘（尖端除外，尖端直径约100μm）的钢丝构成，尖端相距约03mm，插入位点在海马穿通纤维角状束，相对于颅骨立体定位坐标：以人字缝为零点，向后约78mm，中线偏右44mm，插入深度约28~30mm。记录电极是用2

5、mol/LNaCl灌制的玻璃微电极，尖端约3~5μm,阻抗1~3兆欧，用来记录细胞外场电位反应，插入位点是海马齿状回颗粒细胞，相对于颅骨立体定位坐标：人字缝向后约38mm，中线偏右20~22mm，插入深度约20~40mm。18反应波形测定用单脉冲刺激海马穿通纤维，在海马齿状回颗粒细胞记录反应波形，利用微电极推进器，控制电极缓慢下插（10μm/次），当微电极到达齿状回颗粒细胞区时可以记录到负向、延迟很短的场电位，称为兴奋性突触后电位（EPSP）。随电极的下插，负向EPSP逐渐消失，代之以正向EPSP，主要在颗粒细胞的体层中记录。一般以负向到正向的EPSP反转点为标准，向下插

6、约150~200μm时，即可在计算机上看到一系列的反应波形，选取其中幅度较大、波形较好且较稳定的波形。19实验参数的测定191输入/输出曲线（I/O曲线）测定单脉冲的I/O曲线。利用正向或负向方波（mA×02ms)刺激海马穿通纤维，低强度刺激时出现正向单突触EPSP，是由于激活了穿行于齿状回颗粒细胞之间的穿通纤维突触，引发小的较弱的兴奋性突触后电位，此电位不能达到颗粒细胞兴奋所需要的阈值。随着刺激强度的增大，齿状回颗粒细胞达到动作电位阈值，引发颗粒细胞发放，从波形上可以看到一负向峰叠加在正向EPSP上，其为群峰电位（populationspike,PS),反映了刺激穿通纤维在

7、海马齿状回颗粒细胞所产生的动作电位总和。刺激强度逐渐加大，直到10mA为止。每一个刺激强度都要求采用3次波形值以作平均。刺激频率为0125Hz。EPSP和PS幅度按Gilbert和Mack［9］等方法计算：EPSP幅度一般为反应开始约10ms的固定间隔点到PS发放前约05ms的上升相的两点间斜率来计算（mV/ms),这样计算是为了防止PS对EPSP的干扰。PS幅度为峰—峰间连线的中点到波谷间的距离（mV)。192长时程增强（LTP）和长时程抑制