大口静灰球生药学研究论文

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1、大口静灰球生药学研究论文翁丽丽，齐放，宋启印，王淑敏【摘要】目的对大口静灰球进行生药学研究，建立其质量控制标准。方法采用性状鉴别、显微鉴别的方法;利用高效液相色谱法测定麦角甾醇含量，对大口静灰球进行生药学初步研究。结果建立了大口静灰球的性状、显微鉴别方法，制定了麦角甾醇的含量测定方法与指标，其样品平均加样回收率为100.48%.freel。不孕基部小，外包被浅青褐色至浅烟色，薄，粉粒状，易脱落。内包被膜质，柔软，浅灰绿色，具光泽，成熟后上部不规则开裂成大口。孢体浅烟色。海绵状，具弹性2(图1)。图1大口

2、静灰球2.2大口静灰球的显微鉴别2.2.1大口静灰球临时装片的制备将适量大口静灰球研碎成粉末，取极少量粉末涂于载玻片上，滴加2滴水合氯醛，轻轻盖上盖玻片，避免产生气泡，制成临时装片。2.2.2大口静灰球的显微鉴别3~5将大口静灰球粉末临时装片置于显微镜下，观察，找出大口静灰球粉末的典型特征。2.2.3实验结果孢子球形，黄褐色，光滑或具不明显小疣，直径4.5～5.5μm。具无色透明小柄，长5～12.5μm。孢丝褐色，稍有分枝，直径2.5～6μm。见图2~3。图2孢子(10×40)图3孢丝(10×40)2.

3、3高效液相色谱法测定大口静灰球子实体中麦角甾醇含量2.3.1对照品溶液的制备精密称取麦角甾醇对照品5mg，置于5ml量瓶中，加甲醇溶解，定容，即得。2.3.2供试品溶液的制备麦角甾醇样品的制备：精称大口静灰球子实体4g，石油醚(60～90℃)索氏提取6h，提取物水浴蒸干，乙醇溶解并定容至10ml，即得样品液。2.3.3色谱条件色谱柱为DiamondOSD(250mm×4.6mm,.freel);流动相为甲醇;检测波长282nm;柱温25℃;理论塔板数按麦角甾醇计不低于3000。2.3.4方法学考察标准曲

4、线的绘制：精密称取麦角甾醇对照品适量，加流动相制成1mg/ml的对照品溶液，即得。进样量分别为9，12，15，18，21μl，注入液相色谱仪，以相应含量为横坐标，峰面积为纵坐标，峰面积分别为9710.56，13047，16370.9，19749.4，23081.5，进行线性回归，得回归方程为Y=1114.8X-330.27，r=1，表明其在9～21μg线性范围良好精密度实验：精密称取麦角甾醇对照品，加甲醇制成1mg/ml的对照品溶液，精密吸取对照品溶液15μl，注入高效液相色谱仪，重复5次，记录峰面积积

5、分值分别16975，16472，16157，16446，16429，结果RSD1.80%，结果表明精密度良好。稳定性实验：取提取的同一样品，依照供试品溶液制备方法，于0，2，4，8，12，24，48，72h，分别测定峰面积，记录峰面积积分值分别为17629，17390，17748，17428，17526，17236，17632，17895。实验结果表明，样品溶液在72h内测定，色谱峰无明显变化，RSD1.20%，表明样品在72h内稳定重复性实验：取提取的同一样品溶液5份，平行操作，测定麦角甾醇的含量，峰

6、面积分别为20832，20856，20863，20888，20902,计算其RSD为0.13%。表明实验重复性良好。回收率实验：精密称取已知含量的样品，分别精密加入麦角甾醇对照品7.0μg，按供试品溶液的制备方法及上述高效液相色谱条件操作，测定其含量，计算回收率。结果见表1表1大口静灰球中麦角甾醇加样回收率实验结果样品中含量m/μg麦角甾醇m/μg测得值m/μg回收率(%)平均值(%)2.3.5含量测定取大口静灰球子实体，按“2.3.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.3”项下色谱条件进样测定，计算

7、大口静灰球提取液中麦角甾醇的含量，结果分别为1.713，1.721，1.709mg/g，平均值为1.714mg/g(见图4)。麦角甾醇在9～21μg范围内呈良好的线性关系，加样平均回收率为100.48%，RSD为1.26%。方法稳定可靠，准确性高，操作简单。A.对照品;B.样品图4大口静灰球HPLC图3小结通过大口静灰球粉末显微鉴别，发现其孢子的特征可作为区别于其他马勃类药材(例如大马勃、脱皮马勃、紫色马勃等)的主要鉴别依据，为临床合理用药提供依据。采用高效液相色谱法测定大口静灰球中子实体中麦角甾醇含量

8、，在流动相为甲醇，检测波长为282nm，柱温为25℃，理论塔板数按麦角甾醇计不低于3000的条件下，麦角甾醇在9～21μg范围内呈良好的线性关系，加样平均回收率为100.48%，RSD为1.26%。方法稳定可靠，准确性高，操作简单，可应用于大口静灰球的质量控制，为马勃进一步的研究提供了参考6。【