高生物活性复合人工骨修复骨缺损的实验研究

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1、高生物活性复合人工骨修复骨缺损的实验研究-->高生物活性复合人工骨修复骨缺损的实验研究[摘要]目的:探讨载有转化医学论文代写生长因子β1(TGF-β1),具有高生物活性复合人工骨修复骨缺损的价值。方法:建立SD大鼠下颌骨缺损模型。采用组织学和分子生物学SlotBlot杂交法,检测羟基磷灰石复合TGF-β1实验组,单纯羟基磷灰石对照组,无材料修复的空白对照组在骨缺损愈合过程中的组织学及Ⅰ型胶原mRNA的表达状况。结果:实验组的新骨形成及Ⅰ型胶原mRNA的表达水平最高。结论:提示载有TGF-β1的高生物活性复合人工骨局部使用能促进骨愈合。[关键词]下颌骨/

2、外科学;羟基磷灰石类;转化生长β因子;胶原;基因表达;骨再生;大鼠[Abstract]Objective:Toassesethevalueandclinicalsignificanceofbioactivematerial-hydroxyapatite(HA)binedaterial-HAgranules-binedodel.TheresultsonstratedthehighestleveloftypeⅠcollagenmRNAduringhealingperiod.Conclusion:Thebioactivematerial-HA-binedin

3、ggroa公司)液中浸泡吸附。1.2骨缺损模型建立及实验分组选用SD大鼠68只(浙江大学医学院实验动物中心提供),雌雄各半,6~7周龄,体重180~250g。实验动物按1g/kg1%戊巴比妥注入腹腔麻醉,无菌条件下,采用下颌下切口暴露下颌骨,分别在双侧下颌骨体部形成2mm×6mm×2mm箱状骨缺损区,生理盐水冲洗,然后,按组植入材料,分为羟基磷灰石复合TGF-β1组(A组,28只),单纯羟基磷灰石组(B组,28只),不植入任何材料为空白对照组(C组,12只)。A、B2002年JOURNALOFZHEJIANGUNIVERSITY(MEDICALSCIE

4、NCES)Vol31No12002两组植入材料后,压实并用耳脑胶固定,C组分层缝合切口。术后肌注青霉素每日8万U3d。A、B两组分别于移植后1、2、4、8周取标本分4组,每组7只,另外,C组也按上述时间段分4组,每组3只。1.3探针RatⅠ型胶原DIG标记的寡核甘酸探针[2,3],α1:5′GCCGTCTTCAGAGCTGTAAACGTGGAAGCAAGGAGTCCC-3′,上海生工生物公司提供;Ratβ-actin1:5′CAGAAGGACTCCTACGTG3′,Ratβ-actin2:5′GCTCGGTCAGGATCTTCATG3′,由浙江大学医学

5、院传染病研究所合成。1.4标本处理及组织学观察分别于术后1、2、4、8周处死动物,取下颌骨,切割骨缺损区外周1mm的骨组织标本,一半标本保存于-80℃,取出另一半经4%多聚甲醛固定,0.5molEDTA脱钙,石蜡包埋切片,HE染色,光镜下观察。1.5SlotBlot杂交方法按文献[4],骨缺损区总RNA样本提取后,变性并于尼龙膜点样,装入RP648点样仪加样抽吸,80℃干烤;42℃预杂交;加入Dig标记的寡核苷酸Ⅰ型胶原探针[3],42℃杂交,膜于2×SSC/0.1%SDS,0.2×SSC/0.1%SDS漂洗;经bufferⅠ洗膜2min,buffer

6、Ⅱ封闭30min,bufferⅠ洗膜2min,bufferⅠ稀释;anti-Dig-Ap反应1h,bufferⅠ洗膜10min×3次;bufferⅢ平衡5min,NBT、bufferⅢ显色,避光反应,TE终止。杂交结束。杂交膜经光密度扫描,数据单位以每毫米面积的光密度比值表示。1.6统计学处理采用SPSS-PC软件包,数值以x-±s表示,表1用多组方差分析后行q检验。2结果2.1组织学观察1周时A组、B组及C组缺损区均可见炎症反应,中性粒细胞浸润,A、B组材料组织界面有纤维组织长入,无骨形成;2周后A、B组HA微粒间及C组可见炎症细胞中度浸润,材料骨界

7、面A组近骨壁处可见少量新骨形成,部分区域可见纤维样组织存在,B、C组未见新骨形成;4周后,A组、B组及C组局部炎症反应明显减退,A组材料骨界面近骨壁处新骨形成较多,近材料区纤维组织减少,B组新骨形成少于A组,C组部分新骨形成,缺损区域减少,骨组织边界不明显;8周时,可见B组材料骨界面纤维组织减少,新生骨增多,A组材料颗粒间被大量新生骨充满(图1),C组缺损区域减少。箭头所指为材料骨界面区图1A组8周时HA复合TGF-β1组材料颗粒间被大量新生骨充满(HE10×10)Fig.1IngroupA,newbonefilledwithHAgrainin8wee

8、ks2.2SlotBlot杂交表1示-->A、B、C三组Ⅰ型胶原的mRNA表达水平比较有显著差