浅议复合人工骨对兔骨缺损的修复作用

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1、浅议复合人工骨对兔骨缺损的修复作用ok3alstemcellsMSCs)为种子细胞，制成细胞-载体复合物，用来修复兔桡骨骨缺损，检查修复情况。　　1、资料和方法　　1.1一般资料。BM-Ⅱ型水浴式生物组织包埋机(Olmpus,日本)，1512型组织切片机(K-08,山东潍坊医疗器械厂，潍坊)，水浴式自动恒温摊片器(TD5A-odifiedtetrachrome染液。　　1.2试验动物分组选用健康成年中国大白兔72只，重2.0~2.5kg,雄雌不限，随机分为实验组(A组)，对照组(B,C组)，每组24只。A组行同种异体骨髓基

2、质干细胞骨移植，B组行自体骨移植，C组行空白支架。　　1.3手术方法速眠新5ml/kg耳缘静脉麻醉后，仰卧位固定，术区剪毛，碘伏酒精消毒，铺洞巾。取右侧前肢中段桡侧骨凸起处做约3.0cm纵形切口，逐层切开，保护血管、分离软组织后显露桡骨。在距桡骨远端2.0cm处用线锯截断桡骨，再向近端距第1截骨线1.0cm处做第2截骨线，切除1.0cm骨段，A组植入同种异体基质干细胞复合物、B组原位植入自体骨，C组植入支架，彻底止血、冲洗后依次缝合筋膜与皮肤，无菌敷料绷带包扎。术后肌注青霉素针剂每次50万单位，1次/d,连续5d,在相同条

3、件下用标准饲料分笼饲养。由于兔前肢的上下尺桡关节先天性骨性融合，桡骨离断后尺骨可发挥很好的支撑作用，故骨折端稳定性好，不需要内外固定。术后4周、8周、12周分批取材进行拉伸应力实验、X线片和HE染色以及内源性BMP-2表达情况的检查，然后作对比分析。　　1.4标本处理。分别于术后4、8、12周分3批，每组各随机抽取8只动物，先行拍摄X线片，然后用气体栓塞法处死，于右侧前肢桡骨骨折端取材(切取以骨折端为中心2cm的骨段)。肉眼大体观察后用生理盐水冲洗，立即置于4%多聚甲醛溶液，在室温下固定24~48h.置于福尔马林100ml

4、、生理盐水800ml、甲酸70ml、盐酸80ml、三氯化铝60g、乙酸25ml配成的混合脱钙液中1周，至脱钙满意后，梯度酒精脱水，叔丁醇透明，石蜡包埋，5μm厚度组织切片，行HE染色及免疫组织化学[1][2][3][4]下一页ok3A、50kV、0.05S[6].　　1.6拉伸应力实验。国标拉力机下行10mm/s拉伸实验，记录产生断裂时的最大拉力值，然后将各组进行比较。　　1.7光镜观察。光镜下观察HE染色切片，比对组织学变化。　　1.8免疫组化观察。比较3组生物因子BMP-2表达情况。生物因子的表达情况经计算机图像分析系

5、统处理后用平均灰度值来表示。　　1.9统计学处理平均灰度值用均数标准差表示，使用统计学软件SPSS14.0进行配对t检验，3组比较，P<0.05.　　2、结果　　2.1放射学检查　　实验A组：术后4周时骨缺损处有低密度组织阴影出现，骨折端有新生骨痂出现;术后8周骨痂量增多，且其骨密度增加，部分骨缺损已经达到临床愈合;术后12周骨痂量明显增多，且密度接近正常骨密度，出现骨髓腔结构，髓腔再通。　　对照B组：术后4周时骨折端有低密度组织阴影出现骨折端有新生骨痂出现，骨折线明显模糊;术后8周骨痂量增多，且其骨密度增加密度接近

6、正常骨密度，出现骨髓腔结构;术后12周已经达到临床骨愈合，髓腔再通。对照C组：术后4周时无骨痂形成，骨折边缘光滑;术后8周骨折边缘趋向模糊，无明显骨痂形成;术后12周骨折边缘模糊，少量骨痂形成。　　2.2拉伸应力实验　　各组在10mm/s的速度下，断裂时所承受的拉力值，见表1,用SPSS14.0统计软件包处理数据，将同一时段各组平均分值分别进行配对t检验，见表2.　　2.3光学显微镜　　观察实验A组：术后4周，骨膜下可见大量成骨细胞和软骨细胞，并可见少量成纤维细胞和新生毛细血管，植入的骨基质和原有骨组织之间有成骨细胞出现;

7、术后8周，植入的骨基质周围出现原始骨痂，骨膜下可见新生骨小梁，骨小梁周围可见大量成骨细胞，骨膜下新生骨组织连成片状，在其表面可见栅栏状排列的成骨细胞;术后12周骨膜下新生骨组织连成片状，在其表面可见少量成骨细胞，骨折端和骨膜下成骨过程基本完成。试验B组：术后4周，骨折端的间充质细胞向成软骨细胞转化，并可见少量成纤维细胞和新生毛细血管，可见大量软骨细胞和成骨细胞;术后8周，骨膜下可见新生骨小梁，骨小梁周围可见大量成骨细胞;术后12周，骨折端和骨膜下成骨过程基本完成，成骨细胞逐渐减少。试验C组：术后4周，骨折端可见少量新生骨小

8、梁，骨膜周围可见大量纤维结缔组织、炎性细胞、脂肪细胞和少量的软骨细胞、成骨细胞;术后8周，可见少量排列紊乱的骨小梁，周围分布大量纤维结缔组织、脂肪细胞、炎性细胞、少量的成骨细胞;术后12周，新生骨小梁完成，骨组织呈紊乱无序排列，骨小梁间间隙宽大数量多，未见成骨细胞。　　2.4免疫组化　　观察实验A组：术