实验性脊髓空洞前状态神经元凋亡及nf

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1、实验性脊髓空洞前状态神经元凋亡及NF孙国柱，张庆俊，张更申，李建峰【关键词】性脊髓EffectofNFκB,Bcl2andBaxonneuronalapoptosisinexperimentalpresyrinxstate【Abstract】AIM:ToinvestigateneuronalapoptosisinexperimentalpresyrinxstateandtheregulatoryroleandmechanismofNFκB,Bcl2andBaxinrabbits.METHODS:Theexperimentalsyri

2、ngomyeliamodelsofrabbitseasuredmunohistochemistryin1,3,7,14and21dafteroperationrespectively.RESULTS:paredthe1stdayafteroperation,reacheditspeakat3rdday,remainedtheretill7thday,andreturnedtoanormallevelat14thdayapproximately.TheIκBexpressionshoetimepoints.TheBcl2andBaxe

3、xpressionsincreasedfromthe1stday,reacheditspeakat7thday,remainedtheretill14thday,andthenbegantodrop.CONCLUSION:Inpresyrinxstateofexperimentalsyringomyelia,theincreasingexpressionofNFκBmainlyupregulatesitstargetgeneBax,thusinducingneuronalapoptosistoinvolveinnervousfunc

4、tioninjury.【Keyyelia;TUNEL;immunohistochemistry;apoptosis【摘要】目的：研究实验性脊髓空洞前状态神经元凋亡及NFκB，Bcl2，Bax的调控作用.方法：选用新西兰白兔，用TUNEL法和免疫组化技术检测脊髓空洞前状态脊髓神经元凋亡情况和NFκB，IκB，Bcl2，Bax表达变化.结果：高岭土组动物在术后各个时段均有神经元凋亡发生，以7～14d最为多见；NFκB于术后1d就有表达增高，在3d达到高峰，维持至7d后开始回落，14d时基本恢复正常水平；IκB的表达与NFκB的表达呈负相

5、关依存关系；Bcl2和Bax表达则于术后1d开始增加，到术后7d达高峰，持续至14d后开始下降.结论：脊髓空洞前状态发展过程中，作为多向转录调节作用的核蛋白因子NFκB表达增高，主要上调其靶基因Bax，诱导神经元凋亡，参与实验性脊髓空洞前状态神经功能损害.【关键词】NFκB；脊髓空洞症；TUNEL法；免疫组化；细胞凋亡0引言脊髓空洞症（Syringomyelia，SM）是一种发病隐匿、缓慢进展的脊髓退行性病变，发病机制尚不完全清楚.由于缺乏有效治疗方法，故预后不佳.我们先前的研究〔1〕证实，SM在形成前2ingen公司)；鼠抗IκB

6、αmAb、鼠抗Bcl2mAb、鼠抗BaxmAb(SantaCruz公司).SABC免疫组化试剂盒、细胞凋亡检测试剂盒(武汉博士德公司产品).高岭土(分析纯，上海试剂四厂).HPIAS1000彩色病理图文分析系统（同济医科大千屏影像公司）.1.2方法1.2.1动物分组和模型制作将动物随机分为3组，高岭土组40只，生理盐水组和假手术组各8只.动物在氯胺酮（30mg/kg）耳缘静脉麻醉下，经皮枕大池穿刺，缓慢抽出无色透明脑脊液0.6mL后，高岭土组动物注入37℃，250g/L高岭土悬浊液0.6mL；生理盐水组动物注入37℃生理盐水0.6m

7、L；假手术组动物仅行枕大池假穿刺.1.2.2术后神经功能判定按改良的Tarlov评分法对动物进行行为学检查评分.0分:肢体完全瘫痪；1分：有肢体运动，但不能站立；2分：可站立，但不能行走、负重；3分：可行走、负重，但步态不稳；4分：正常.1.2.3标本的制作和采集生理盐水组和假手术组在术后、高岭土组在第1，3，7，14，21日各随机选取动物8只，在氯胺酮过度麻醉下，40g/L多聚甲醛经心脏灌注,经后正中切口，咬除脊突和椎弓根，取出上颈髓置入相同固定液中后固定24h，常规脱水、透明、石蜡包埋、4μm切片并裱于经10g/L多聚赖氨酸处理

8、的清洁载玻片，用于HE染色和免疫组织化学染色观察.1.2.4免疫组化染色NFκB，IκB，Bcl2和Bax的表达按免疫组织化学常规步骤进行.细胞内有棕黄色粗颗粒分布或棕黄色细腻颗粒分布者为阳性反应细胞.采用病理图文分析系统，每张切片任