基因重排检测技术的建立及其在淋巴瘤诊断中的应用

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1、基因重排检测技术的建立及其在淋巴瘤诊断中的应用作者：朱少君，李艳红，张伟，王旭霞，巩丽，李爱宁,兰淼【关键词】淋巴瘤Detectionandclinicalsignificanceofgenerearrangementsindiagnosisoflymphomas　　【Abstract】AIM:ToestablishaentsofIgHandTCRandtoassesstheapplicationofthedetectiontechniqueinthediagnosisofmalignantlymphoma.METHODS:Fiftythreecasesofmalign

2、antlymphomaand20casesofreactivelymphoidhyperplasiaakingtissuesections.GenomicDNAplifiedviaPCR.Theproductsidegelsandvisualizedthroughsilverstaining.RESULTS:GenerearrangementsofIgHandTCRphoidhyperplasia.Inallof18casesofTcellnonHodgkinslymphoma(TNHL),generearrangementofTCRγentententsofTCRγa

3、ndIgHentin3casesofsuspectedlymphomas.Therearkabledifferencebetent(P<0.05).CONCLUSION:ThedetectionofgenerearrangementsofIgHandTCRbyPCRcanbeakindofsubsidiarymeanstodiagnosethelymphoproliferativedisease.Particularly,theclonalityshoalinfixedandparaffinembeddedsamplesmaybeusefulintheretros

4、pectiveresearches.　　【Keyphoma;generearrangement;polymerasechainreaction;neoplasm　　【摘要】目的：建立基于克隆性分析技术的B和T淋巴细胞产生的抗原受体分子基因重排检测技术，探讨B淋巴细胞免疫球蛋白及T淋巴细胞受体基因重排在恶性淋巴瘤临床诊断中的应用.方法：从组织蜡块中切取组织片5~10张，提取基因组DNA，PCR扩增，聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显示基因重排结果.结果：20例良性淋巴组织反应性增生病例中,淋巴细胞IgH及TCR基因重排均为阴性；18例T细胞非何杰金氏淋巴瘤中TCRγ基因重排12例

5、,TCRβ基因重排3例，未见有IgH基因重排；32例B细胞性非何杰金氏淋巴瘤标本中有28例IgH基因重排阳性,有2例TCRγ和IgH基因重排均阳性；3例未确诊的疑难病例均为IgH基因重排；IgH及TCR基因重排检出率在淋巴瘤组与良性组之间，差异有显著意义(P<0.05).结论：应用PCR法检测B淋巴细胞IgH和T淋巴细胞TCR基因重排可作为淋巴细胞来源的良、恶性病变的一种辅助诊断手段，且适用于石蜡标本以进行回顾性研究.　　【关键词】淋巴瘤；基因重排；聚合酶链反应；肿瘤　　0引言　　恶性淋巴瘤(malignantlymphoma)是免疫系统的原发性恶性肿瘤,主要发生

6、于淋巴器官和淋巴组织.根据肿瘤的组织结构及细胞学特征可分为何杰金氏病（Hodgkinsdisease,HD）及非何杰金恶性淋巴瘤（nonHodgkinsmalignantlymphoma,NHL），淋巴瘤的诊断一直是病理诊断中的难点，部分淋巴组织增生性病变单纯通过HE和免疫组化很难明确性质，另外NHL由于种类繁多，分类复杂，给临床病理工作者带来了一定的困难.　　淋巴细胞从原始的胚系构型到分化成熟,其抗原受体(Ig和TCR)基因通过基因重排而形成有功能的基因.一个T，B细胞或其克隆性后代，均只含一种独特的分子遗传学标记.一旦某一克隆的淋巴细胞发生恶性变化,即可呈现特异的基

7、因重排［1］.因此,对基因重排类型进行检测可用于对淋巴细胞增殖性疾病的诊断.此研究拟应用这一手段，探讨淋巴组织增生性病变的性质，并对该技术在恶性淋巴瘤中的诊断价值进行探讨.　　1材料和方法　　1.1材料53例恶性淋巴瘤标本均来自第四军医大学唐都医院病理科（1995~2005）.其中男性29例（55%），女性24例（45%）；年龄12~76岁，平均年龄44.2岁.所有标本均为福尔马林固定、石蜡包埋组织.其中B细胞非何杰金淋巴瘤32例，T细胞非何杰金淋巴瘤18例，未能定性的淋巴组织增生性病变3例.20例良性淋巴组织反应性增生病例作为阴性对照.