吸光光度法教学

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1、第十一章吸光光度法一光的基本性质吸光光度法是基于被测物质的分子对光具有选择吸收的特性而建立的分析方法。光是一种电磁波，具有波粒二象性，不同波长的光具有不同的能量。射线x射线紫外光红外光微波无线电波10-2nm10nm102nm104nm0.1cm10cm103cm105cm可见光第一节物质对光的吸收基本原理光的波粒二象性波动性粒子性E光的折射光的衍射光的偏振光的干涉光电效应E：光子的能量（J,焦耳）：光子的频率（Hz,赫兹）：光子的波长（cm）c：光速（2.99791010cm.s-1）h：Pl

2、ank常数（6.625610-34J.s焦耳.秒）单色光、复合光、光的互补单色光复合光光的互补单一波长的光由不同波长的光组合而成的光若两种不同颜色的单色光按一定的强度比例混合得到白光，那么就称这两种单色光为互补色光，这种现象称为光的互补。蓝黄紫红绿紫黄绿绿蓝橙红蓝绿物质的颜色与光的关系完全吸收完全透过吸收黄色光光谱示意表观现象示意复合光吸收光谱光作用于物质时，物质吸收了可见光，而显示出特征的颜色，这一过程与物质的性质及光的性质有关。物质对光的吸收物质对光的吸收满足Plank条件A物质对光的选择吸收物质的电

3、子结构不同，所能吸收光的波长也不同，这就构成了物质对光的选择吸收基础。例：A物质B物质同理，得：1ev=1.610-19J.吸收光谱的获得AbsorptionSpectra测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得一曲线，此曲线即为吸收光谱。(a)(b)(c)(d)220240260280nmA0000(a)联苯（己烷溶剂）；一些典型的紫外光谱(b)苯（己烷溶剂）；(c)苯蒸汽；(d)Na蒸汽。第二节光吸收基本定律一、朗伯-比尔定律透光率定义

4、：T取值为0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%入射光I0透射光It二、朗伯-比尔定律的推导I0dbbItII-dIdI∝NIN：薄层中的吸光粒子数N=N0cdSdbN0：阿伏加德罗常数dS：捕获面积，薄层中被光照射的面积。c：吸光溶液的浓度N=k’cdb故dI∝NI=Ik’cdbdI=-Ikcdb,dI/I=-kcdb积分得或得三、吸光度与透光率T：透光率A：吸光度1.00.50ACA100500T%TT=0.0%A=∞T=100.0%A=0.0A=0.434T=36.8%四、吸

5、光系数b：吸光液层的厚度，光程，cmc：吸光物质的浓度，g/L,mol/LK：比例常数入射光波长物质的性质温度取值与浓度的单位相关c：mol/LK摩尔吸光系数，L·mol–1·cm-1c：g/LKa吸光系数，L·g–1·cm-1c：g/100mLK比吸光系数相互关系MolarAbsorptivityAbsorptivitySpecificextinctioncoefficient吸收定律与吸收光谱的关系AC吸光定律A或吸收光谱ACmax吸收光的加合性多组分体系中，如果各组分之间无相互作用，其吸

6、光度具有加合性，即对吸收定律偏离AC主要原因物理因素化学因素物理因素化学因素吸收定律偏离非单色光引起的偏离非平行光引起的偏离介质不均匀引起的偏离溶液浓度过高引起化学反应引起的偏离非单色光引起的对吸光定律的偏离-物理因素设入射光由1和2两种波长组成，溶液的吸光质点对两种波长的光的吸收均遵从吸收定律121+2或或非单色光引起的对吸光定律的偏离对吸收光谱而言，b和c固定，反映了随波长变化的情况，单一波长，固定；不同波长，不同。因此，非单色光将导致对吸光定律的偏离。A或12在实际工作中，

7、入射光通常具有一定的带通。为了避免非单色光带来的影响，一般选用峰值波长进行测定。1对应的1较小2对应的2较大选用峰值波长，也可以得到较高的灵敏度。第三节吸光光度法的仪器分光光度法（紫外-可见分光光度法）UV-VIS0.575光源单色器吸收池检测器显示I0It参比样品入射光I0透射光It请注意与定义比较未考虑吸收池和溶剂对光子的作用一吸光分析法的仪器简介紫外-可见分光光度计组件光源单色器样品池检测器信号输出氢灯，氘灯，185~350nm；卤钨灯，250~2000nm.基本要求：光源强，能量分布均

8、匀，稳定作用：将复合光色散成单色光棱镜光栅玻璃，350~2500nm,石英，185~4500nm平面透射光栅，反射光栅玻璃，光学玻璃，石英作用：将光信号转换为电信号，并放大光电管，光电倍增管，光电二极管，光导摄像管（多道分析器）表头、记录仪、屏幕、数字显示一、分光光度计的基本部件（一）光源分光光度计一般由光源、单色器（分光系统）、吸收池、检测系统和信号显示系统五部分组成光源应能提供足够发射强度、稳定