异牛肝菌素诱导人胃癌细胞bgc-823凋亡的机制研究

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名：终j}确导师签章：f驴3玉二级学院领导训岁河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除

2、了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。、．p研究生签名：练；嫦导师签章：夕]<乙疹郴年岁月谵日万方数据目录中文摘要l英文摘要．．．4英文缩写7研究论文异牛肝菌素诱导人胃癌细胞BGC．823凋亡的机制研究前言月Ⅱ舌．．99．．材料与方法．．10结果．．20附图。。22附表．．27讨论．．29结论．．32参考文献．．．．．32综述自噬与肿瘤关系的研究进展．．36致谢．。46个人简历．．47万方数据中文摘要异牛肝菌素

3、诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡的机制研究摘要目的：胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，在我国其发病率与死亡率高居各种恶性肿瘤的前列。目前，胃癌的治疗包括手术、放疗、常规化疗、分子靶向治疗和生物治疗等。尽管如此，胃癌经过治疗后，其五年生存率仍然小于20％。众所周知，临床上采取的放、化疗会产生严重的副作用。因此，寻找有效治疗恶性肿瘤而且毒副作用小的药物是目前医药工作者的迫切任务。近些年的研究工作表明，一些来自植物和真菌的代谢产物是这类药物的首选。一项研究报告表明1981．2002年间注册的65种抗癌药物中有48种

4、是从天然产物中获得的。目前，从大型真菌中提取活性成分用于临床肿瘤的治疗是新药开发途径之一。异牛肝菌素(iso．suillin)，是由褐环粘盖牛肝菌(Suilluslmeus)子实体中得到的一种化合物，分子量为440．29，化学名为3，6．二羟基一【(2E，6E，10E)．3，7，11，15．六甲基十六碳．2，6，10，14．四烯]苯乙酯，是粘盖牛肝菌素suillin的同分异构体，属于聚异戊二烯酚类化合物。近年来研究发现，iso—suillin能够明显抑制肿瘤细胞活性。本实验旨在观察iso．suillin

5、对人胃癌细胞BGC一823增殖和凋亡的影响，并研究其诱导凋亡的分子机制。方法：1细胞培养：BGC．823细胞以RPMll640培养基培养，内含10％胎牛血清、青霉素100U／ml、链霉素100叫ml，置37℃、5％C02环境下培养。2MTT检测iso．suillin对BGC．823细胞的抑制作用：不同浓度的iso—suillin(0、3．5、7、14、28，、56、112Ixmol／L)分别作用于对数生长期的BGC．823细胞24、48和72h。定时检测细胞生长情况，每孔加入5m#mlMTT20LLl，

6、继续孵育4h，离心吸去上清，加入二甲基亚砜(Dimeffiyl—sulfoxide，DMSO)裂解细胞。用酶标仪测490nm波长吸光值(彳值)，计算抑制率：抑制率(％)=f(对照必．实验拟)／对照组棚×100％。得出iso．suillin作用的半数抑制浓度(IC50)。万方数据中文摘要3细胞形态学观察：BGC．823细胞种于6孔板后用不同浓度的iso．suillin处理48h。(1)在光学显微镜下观察iso．suillin对BGC．823细胞形态的影响。(2)荧光显微镜(Olympus，Japan)观察

7、记录细胞形态变化。(3)采用透射电子显微镜观察细胞超微结构变化。4流式细胞术检测细胞凋亡率：细胞经药物作用后，经PBS冲洗，70％乙醇固定，50ug／ml碘化丙锭(propidiumiodide，PI)染色30min后，采用流式细胞仪分析。5蛋白印记检测相关蛋白表达：收集人胃癌BGC．823细胞，加入细胞裂解液提取蛋白，之后用试剂盒测定蛋白浓度。样品经SDS—PAGE电泳、硝酸纤维素膜转移、5％脱脂奶粉封闭、经一抗和二抗作用、ECL显影，用凝胶图像分析系统测定目的蛋白的光密度值，并与相对应的D—acti

8、n条带光密度比较，计算表达量。6统计学方法：所有数据以均数±标准差(x士s)表示，采用SPSSl3．0统计软件进行统计，作单因素方差分析(One．WayANOVA)，P<0．05为有显著差异。结果：lMTT法：实验结果显示，相同浓度的iso．suillin作用于BGC．823细胞后，其抑制率随时间的延长而增大。而在处理时间相同时，随药物浓度越高，其抑制率越大。2形态学的改变：(1)光镜结果显示，随着iso．suillin浓度的增加，细胞变小