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1、微囊藻毒素微囊藻毒素是富营养化的淡水水体中常见的藻类毒素，它是一类具有蛋白磷酸酶抑制和强烈致肝癌作用的环状七肽。目前已经报道的微囊藻毒素已有70多种，其中微囊藻毒素LR是（microcystinLR,MC-LR）已知毒性最强、急性危害最大的一种淡水蓝藻毒素。以基因工程抗体技术的主流形式——噬菌体展示技术为例，目前利用噬菌体展示技术，筛选制备MC-LR的单链抗体或多肽配体的研究，已有少量报道。从鼠源合成噬菌体抗体库中，快速分离获得微囊藻毒素LR单链抗体【1】另外，由于单链抗体具有大规模、均一化生产等优点，有潜力应用于微囊藻毒素LR的免
2、疫学检测或免疫亲和柱的制备，同时也探索了一种高效的微囊藻毒素LR单链抗体的库筛选、鉴定方法。文献：【1】【基于磁珠和时间分辨荧光免疫分析的微囊藻毒素LR单链抗体筛选与鉴定】刘媛1,HuovinenTuomas2，刘贤金1，梁颖1，张存政1，谢雅晶1,贺江1，王耘1,张霄1（1江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所，中国南京200014；2芬兰图尔库大学生物系，芬兰图尔库20520河豚毒素河豚毒素（TTX）是一种小分子量的、胍盐神经毒素它存在于河豚、蝾螈、斑足蟾等动物中的海洋毒素。它主要通过抑制神经或肌肉组织的钠离子（Na+）电压门
3、控通道起作用，从而导致神经麻痹、呼吸困难甚至是死亡。但是到目前为止，针对河豚毒素的有效的、快速灵敏的检测方法还没有出现，而发展针对河豚毒素的免疫学方面的检测方法是非常有必要的。抗河豚毒素的基因工程单链抗体的制备首先通过一种化学方法（曼尼希反应）来制备了河豚毒素的完全人工抗原（TTX-BSA：作为检测用抗原；TTX-KLH：作为免疫用抗原），并且采用了小量的、重复的免疫方式，实验组总共免疫了3只Balb/c小鼠。从免疫好的小鼠的脾脏中提取其全RNA，并反转录合成cDNA的第一条链，以此作为模板通过常规的PCR反应扩增了抗体的重、轻链的
4、可变区基因（VH和VL），配以适当分子数的Linker（（G4S）3），通过重叠延伸PCR组装成了一个可以无限制编码抗河豚毒素（TTX）的重组的单链抗体（scFv）基因。通过噬菌体展示技术，构建了一个依托于噬菌体质粒载体pCANTAB-5E的噬菌体展示文库。在经过辅助噬菌体M13KO7的再感染后，单链抗体就会展示在噬菌体的表面，然后再经过六轮的淘选过程，我们获得了可以和河豚毒素（TTX）特异性结合的抗体，并通过间接ELISA对其进行了定量的分析，选定其中的一株亲和力最高的单克隆（scFv-T53）进行了单链抗体的可溶性表达和各方面性
5、质的分析研究，通过间接ELISA测定选定的单克隆的亲和力常数为1.1×106L/mol。我们还通过生物信息学的手段，分析了scFv-T53的基因序列、氨基酸序列，预测了scFv-T53的可变区的划分、二级结构、物理化学性质等。各种分析结果表面。本实验成功的从构建的噬菌体抗体库中筛选得到了特异的抗河豚毒素（TTX）的单链抗体。【2】文献：【2】抗河豚毒素的基因工程单链抗体的制备刘立才1单链抗体的特点单链抗体是一种新型重组蛋白,它是把抗体可变区重链(VH)与轻链(VL)通过一段约15~25个氨基酸残基构成的弹性短肽(Linker)相连而
6、成,这种连接可以是VHlinkerVL,也可以是VLlink-erVH。单链抗体是具有亲代抗体全42部抗原结合特异性的最小功能结构单位,具有分子量小(仅为完整抗体的1/6)、对肿瘤的穿透力强、血流中半衰期短、免疫原性低、可在原核细胞系统表达等特点。2单链抗体的研究进展2.1单价单链抗体1988年,Bird[2]和Huston[3]等最先研究成功单链抗体,他们用PCR技术从杂交瘤细胞的基因组DNA或其RNA反转录后的cDNA中扩增出VH和VL基因,用编码弹性短肽的寡核苷酸将两者连接起来,再将其插入原核细胞进行表达而获得,并发现在大肠杆
7、菌中表达的单链抗体能自发折叠成天然构象,其抗原亲和性几乎与完整抗体相同。1990年,Challdhary等[4]成功地制备了绿脓杆菌外毒素单链抗体基因,其表达的免疫毒素可识别并杀死携带OVB3抗原的细胞。在其后的十几年时间里,研究人员进一步尝试用酵母或植物细胞进行表达并获得成功。2.2单链抗体多聚体与典型的抗体不同,单价单链抗体只有一条轻链和一条重链,在与抗原结合方面还是稍逊于亲本抗体,因此,人们采用易于形成螺旋或折叠的多肽基因,使其与VH和VL基因在表达系统中共同表达,从而产生双价单链抗体。对连接VH和VL的Linker长度与单链
8、抗体多聚体形成关系的研究认为[5]:如果选用由甘氨酸(Gly)和丝氨酸(Ser)组成长度为15~25个氨基酸残基的Linker(序列为GGGGSGGGGSGGGGS),在折叠过程中,单链抗体的VH与VL功能区之间配对,形成单价单链抗体
