绵羊肺炎支原体的分离鉴定及全基因组序列的测定和分析

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1、分类号S852.62学校代码10129UDC11.220学号2010201075绵羊肺炎支原体的分离鉴定及全基因组序列的测定和分析IsolationIdentificationofMycoplasmaovipneumoniaeandGenomicSequenceDeterminationandAnalysis申请人：郝瑞霞学科门类：农学学科专业：预防兽医学研究方向：兽医微生物与免疫学指导教师：郝永清教授论文提交日期：二〇一二年五月摘要绵羊肺炎支原体(Mycoplasmaovipneumoniae，MO)可以引起绵

2、羊和山羊的增生性、间质性胸膜肺炎。在全世界有蔓延的趋势，给养羊业造成了巨大的损失，所以对羊支原体病的研究日益受到人们的重视，本试验从病原的分离鉴定、诊断方法和药物防治等方面对MO进行了研究，为生产上防治该病提供了依据。1、通过对内蒙古四子王旗和达拉特旗的养羊场中疑似患有传染性胸膜肺炎的羊只采集肺脏和胸水共33份，对病料进行无菌剪碎、组织研磨并接种到改良Hayflick培养基中，胸水用0.22µm滤器过滤后接种到改良Hayflick培养基中，之后通过培养和纯化后得到12个分离物。通过染色镜检、生化鉴定和血清学鉴定，

3、证实分离物与绵羊肺炎支原体MO标准株Y-98为同种。2、将符合MO的其中3个菌株，参照NCBI已知MO的16SrRNA的序列设计一对可扩增700bp片段的引物进行PCR扩增，结果标准株Y98和分离物D13、D27和XJ均扩增出与预期结果相符的700bp片段。将电泳亮条带凝胶回收后测序。测序结果显示所测序列与标准株Y-98的同源性分别为97.7%、98.6%和100%。该结果确定了所得分离物为MO的某一成员，证实以上两个地区羊场中导致羊传染性胸膜肺炎的主要病原体为MO。3、本实验室首次采用通过酶标仪测定MO液体培养

4、物的OD450处吸光值的方法绘制了MO的生长曲线。通过对分离株D13、D27、XJ和标准株Y-98在改良Hayflick培养基、改良KM2培养基、改良FM4培养基、改良Hayflick培养基和加入添加剂（OXOID）的支原体基础培养基的生长状况绘制了生长曲线，并通过分析和比较，结果证明改良Hayflick培养基是培养MO的最佳培养基。4、本实验室选取了泰妙霉素、氟苯尼考、卡那霉素、洁霉素、恩诺沙星、新霉素、四环素、链霉素、红霉素、庆大霉素和罗红霉素等12中抗菌药物，对3个分离株进行了敏感药物的筛选，其中卡那霉素、

5、泰妙霉素、新霉素、恩诺沙星、氟苯尼考和洁霉素6种为高敏感药物，此结果表明此6种高敏感药物可以作为防治内蒙古四子王旗和达拉特旗MO的首选药物。5、本实验室对分离株中生长较好的一株绵羊肺炎支原体XJ株进行了全基因组测序，并对其进行基因家族分析，并通过基因预测和基因功能预测，对其全序列进行分析和研究，为以后绵羊传染性胸膜肺炎的防治和疫苗研制提供了重要的依据。关键词：绵羊肺炎支原体；分离；鉴定；全基因组IsolationIdentificationofMycoplasmaovipneumoniaeandGenomicSe

6、quenceDeterminationandAnalysisAbstractMycoplasmaovipneumoniae(MO)isconsideredanemergingveterinarypathogencausingintersticialandproliferativepleuropneumoniainsheepandgoats。Thediseaseappearedtobespreadingintheworld，whichcausedgreatsufferingsandlossestothesheeph

7、usbandry。SopeopleincreasinglypayattentiontothestudyonthediseaseinfectedbyMycoplasmaovipneumoniae。AdeepresearchwasmadeonMOwithisolationandidentificationofpathogen，methodofdiagnosisandpreventionandtrentmenttoprovidethescientificbasisforcontrollingitinproduction

8、。1、12Mycoplasmastrainswereisolatedfrom33pneumonialungsandpleuraleffusionsamplesofprobablyinfectiouspneumoniaofsheepandgoatscomefromthesiziwangqianddalateqiareasinInnerMongolia。Lungtissues