罗非鱼源无乳链球菌灭活疫苗的研制及其免疫效果的研究

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1、广东海洋大学硕士学位论文罗非鱼源无乳链球菌灭活疫苗的研制及其免疫效果的研究姓名：陈贺申请学位级别：硕士专业：水产养殖指导教师：简纪常201206罗非鱼源无乳链球菌灭活疫苗的研制及其免疫效果的研究摘要近年来我国罗非鱼养殖业发展迅速，但罗非鱼相关疾病的爆发频繁发生，特别是链球菌病，给水产养殖业造成了巨大的经济损失。本研究主要针对无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)对中国罗非鱼养殖业造成巨大的危害情况，以制备的无乳链球菌灭活疫苗为研究对象，主要进行了无乳链球菌的分离鉴定及致病性分析、无乳链球菌培养条件的优化、无乳链球菌疫苗对吉富

2、罗非鱼的免疫保护试验。试验从广东、广西、海南的罗非鱼主养区发病的罗非鱼体内分离出40株链球菌，通过传统方法及16SrRNA分子生物学方法相结合的手段对分离的致病性菌株进行鉴定，最终确定40株菌均为无乳链球菌，证明了无乳链球菌是华南地区罗非鱼链球菌病的主要病原。实验还选取6株具有区域代表性的菌株对罗非鱼进行了致病性分析，以研究不同地区的菌株之间毒力的差异，筛选具有较好免疫原性的菌株作为制备疫苗的候选菌株。结果显示，分离于广东湛江的无乳链球菌显示出较强的毒力，适合作为制备疫苗的候选菌株。针对无乳链球菌的培养与生长特性，本试验探讨了脑心浸液(Brian

3、HeartInfusion,BHI)培养基的营养因子、初始pH值、溶氧、温度等因素对无乳链球菌生长的影响，并采用正交实验法对无乳链球菌培养基营养因子添加量进行优化，寻求无乳链球菌培养的最佳参数，以期为无乳链球菌疫苗的研制提供基础资料。结果表明，无乳链球菌生长的最适初始pH为7---8，培养温度为28---37℃，振荡转速为180～200rpm，在BHI培养基中添加2mg／mL的葡萄糖和20mg／mL的酵母粉即可在对数期获得最大细菌量。本研究采用注射和浸泡2种免疫方法，对用无乳链球菌临床分离株ZJ02福尔马林灭活制备的疫苗进行了免疫保护效果的研究。

4、注射组以四个不同浓度的白油佐剂灭活疫苗免疫吉富罗非鱼；浸泡组以相同浓度的灭活疫苗分别与消旋山莨菪碱、脂肪醇聚氧乙烯醚和氯化钠三种不同佐剂免疫吉富罗非鱼。在免疫后的不同时间里对试验鱼进行尾静脉采血，测定罗非鱼血清中抗体效价水平、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活力、过氧化氢酶活性和丙二醛含量。结果显示，无乳链球菌疫苗对罗非鱼具有较强的免疫原性，免疫组与对照组相比，血清中的抗体效价水平均显著性提高，注射组和浸泡组的抗体效价最高分别达到1：256和l：128；注射组中不同浓度的疫苗免疫组获得了较高的免疫保护率，高浓度组可达到95％；浸泡组中使用3种佐剂的免疫

5、组免疫保护率分别为59％、64％、55％。免疫后罗非鱼血清中的抗体效价水平、溶菌酶活性、超氧化物歧化酶活力、过氧化氢酶活性和丙二醛含量与对照组差异显著(P

6、tivatedVaccineofStreptococcusAgalactiaeIsolatedfromTilapiaAbstractIndecades，、)l，itlltherapiddevelopmentoftilapiaaquacultureindustry,thediseasesofculturedfishtookplacefrequently,especiallythediseaseofStreptococcus，causinghugeeconomiclosstoaquaculture．Inthisstudy,wemainlyfocuse

7、donthegreatharmcausedbyStreptococcusagalactiaetothetilapiaaquacultureindustryinchina,developingavaccinetopreventStreptococcosisoffish．StreptococcusagalactiaeWasisolatedandidentificated，cultureconditionsWasoptimizatedandtheefficacyofSagalactiaevaccineintilapiawasevaluated．40st

8、rainsofStreptococcuswereisolatedfromthesamplesofsicknesstilapiainGua