人外周血淋巴细胞亚群抗肿瘤效应的研究

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1、泰山医学院硕士学位论文人外周血淋巴细胞亚群抗肿瘤效应的研究姓名：朱仲丽申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：宋文刚；张明徽2012-02人外周血淋巴细胞亚群抗肿瘤效应的研究研究生：朱仲丽专业：免疫学导师：宋文刚教授张明徽教授中文摘要中又捅要目的对人外周血淋巴细胞各亚群杀伤肿瘤细胞效应进行比较，寻找具有高效杀伤肿瘤细胞能力的细胞亚群，并探索体外优势扩增该群细胞的方法，同时对体外扩增的该细胞亚群的抗肿瘤效应进行分析，从而建立肿瘤细胞治疗的新方法。方法采集健康志愿者的外周血，标记人淋巴细胞谱系标志CD3、CD56、CD

2、8、CD4等对各样本淋巴细胞亚群进行分析和分选。根据自然杀伤细胞(naturalkillercell，NK)细胞和细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxiclymphocyte，cTL)细胞在肿瘤免疫中的作用，本课题关注的淋巴细胞亚群包括CD3-CD56+CD8+细胞、CD3_CD56+CD8一细胞、CD3+CD56+细胞、CD3+CD56-CD8+细胞以及CD3+CD56-CD8时1细胞。分选的淋巴细胞亚群与8种不同个体、不同组织器官来源的人肿瘤细胞系进行体外共培养实验。通过各淋巴细胞亚群与各肿瘤细胞系的共培养实验体

3、系，寻找到具备高效广谱抗肿瘤能力的淋巴细胞亚群，并借助流式细胞仪对其进行了表型和细胞因子分泌谱的检测。利用现有基础研究成果，通过体外添加白细胞介素2(interleukin．2，IL一2)、同种异体树突状细胞等方式，建立体外扩增该细胞亚群的方法学。扩增后细胞经体外精细亚群分选后培养实验，确定其是否来自于体内原有细胞亚群。最后通过体内和体外抗肿瘤实验，确证体外扩增的该细胞亚群能否保持原有的抗肿瘤效应。结果对人外周血各淋巴亚群体外杀伤肿瘤细胞效应比较的结果表明，每个样本中cD8+CD56+细胞对60％以上肿瘤细胞系的杀

4、伤效率最高。流式细胞仪检测结果表明，CD8+CD56+细胞活化后可表达CD25和CD69，不表达CDl07a，并分泌IL一2、肿瘤坏死因子．Q(tumornecrosisfactor—a，TNF—Q)和干扰素丫(interferon-丫，IFNI丫)等细胞因子。体外精细亚群分选后培养，表明体外扩增的CD8+CD56+细胞仍然来源于原有CD8+CD56+细胞亚群。该亚群可通过添加IL．2和同种异体树突状细胞进行体外活化和扩增，且扩增后该亚群对肿瘤细胞系的杀伤能力能够继续保持。体内抗肿瘤实验表明，扩增后CD8+cD56

5、+细胞能够有效抑制HepG2肿瘤细胞在裸鼠体内的生长。结论人外周血各淋巴亚群中CD8+CD56+细胞杀伤肿瘤效应最强，杀伤肿瘤谱最广。CD8+CD56+细胞活化后表达T细胞活化相关标志，分泌IL．2、TNF。0【和IFN_丫等细胞因子，但并不表达CDl07a，提示其抗肿瘤效应可能通过诱导靶细胞凋亡，而非颗粒酶释放途径。本课题初步建立了cD8+cD56+细胞体外活化扩增的方法。通过体外添加同种异体树突状细胞和白介素2，能够显著提高CD8+CD56+细胞的扩增能力，并证明扩增后的CD8+cD56+细胞来源于原有的cD8

6、+cD56+细胞，并能够继续保持其原有高效抗肿瘤能力。关键词：人淋巴细胞亚群；细胞治疗；抗肿瘤能力；CD8+CD56+细胞2RESEARCHoFANTI—TUMoRABILITYoFHUMANPERIPHERALBLooDLYMPⅡoCYTESUBSETSPostgraduate：ZhuZhongliSpeciali哆：SuperVisor：ImmunoIogyProf．SongWengangProf．ZhangMinghuiABSTRACTobjectIve11rytocompareanti．tumorabili

7、tyamongdif．ferenthumanperipheralbloodlymphocyte，soastofindthemostefncienttumoricidallymphocytesubset．ThenitisnecessaurytoexploreamethodtoamplifythesubsetinVitro，withthemaintenanceofanti。tumorcapacityofthissubset．Finally’thetumoricidal￡Lbilityofanlplifiedsubset

8、sshouldbeevaluatedinvitroandinvivo．MethodsPeripheralb100dwascollectedfromhealthyvolunteers，labeledwithhumanlymphoc)rtelineagemarksincludingCD3，CD56，CD8andCD4，foranalysisandsortingb