一株盐单胞菌分离16s rdna基因序列分析鉴定

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1、一株榆林盐碱土壤嗜盐菌的分离及鉴定*孙晓宇陈锐李玥路鹏鹏门欣韩丽萍黄继红沈卫荣**（陕西省微生物研究所微生物资源中心西安710043）摘要目的：从陕西定边盐湖高渗极端环境中筛选分离获得嗜盐微生物，并对筛选获得的微生物进行种属鉴定。方法：通过高盐选择性培养基平板分离法，从陕西定边盐湖土壤样品中，分离筛选获得极端嗜盐菌株，该菌最适生长温度35℃，最适pH8.0。通过传统的表型特征（包括形态学观察、生长因子实验、生理生化特征）和系统发育学16SrDNA序列分析鉴定嗜盐菌株的分类学地位。结果：获得一株最适生长盐浓度在10%~20%的细菌菌株A426，初步鉴定其为盐单胞菌科(Halomonad

2、aceae)盐单胞菌属(Halomonas)菌株。结论：成功获得定边盐湖地区中度嗜盐菌株A426。关键词:嗜盐菌，极端微生物，盐单胞菌,鉴定Isolationand16SrDNAGeneSequenceAnalysisofaHalomonassp.strain*CHENRuiLIYueSUNXiao-YuLUPeng-PengMENXinHANLi-PingSHENJianHUANGJi-HongSHENWei-Rong**（Shaanxiprovinceinstituteofmicrobiology,xi’an,710043）[Abstract]Objective:Isolateh

3、alophilicbacteriastrainfromDingBiansaltlakesample.Methods:ByhighsaltselectedculturemethodandgradientdilutionisolationmethodisolateahalophilicbacteriastrainfromtheDingBiansaltlakesample.Accordingtotheclassicphenotypiccharacteristicswhichincludemorphologicalobservation,growthfactorandthephysiolog

4、icalandbio-chemicalcharacteristics,moderatehalophilestrainA426wastobeidentified.Todeterminethetaxonomypositionofthenewlyisolatedmoderatehalophilebacteriuminevolutionhistory,16SrRNAsequencehomologousalignmentwereperformedbetweenitandrelatedspecies.Results:ThestrainA426whichcangrowoptimallyincult

5、uremediathatcontain10%~20%NaCl.ThemoderatehalophilestrainA426wasidentifiedtobelongtoHalomonassp.Conclusion:SuccessfullyisolateamoderatehalophilestrainA426fromDingBiansaltlake.Keywords:HalophilicBacteria,Extrememicroorganism,Halomonassp.,Identify嗜盐菌是指能在高浓度盐环境下正常生长的微生物,其广泛分布于盐湖、盐场和海洋等富盐极端环境。根据其对盐

6、的嗜耐程度，可分为弱嗜盐菌、中等嗜盐菌、极端嗜盐菌和耐盐菌[1]。嗜盐菌种类繁多，它们的分类主要通过表型特征、生理生化分类方法和分子生物学分类鉴定方法进行鉴定[2]。陕北定边盐湖位于黄土高原与内蒙古鄂尔多斯荒漠草原过渡地带，面积约160hm2，其中花马池为定边盐湖群中面积最大的盐湖，开湖2000余年，湖盆面积6.78hm2，水域0.63hm2。盐湖周围为风沙滩地貌，与毛乌素沙漠西南部接壤，为典型极端环境[3]。本文从陕北定边盐湖农业土壤样本中分离获得一株嗜盐单胞菌，并通过16SrDNA序列的测定，对其进行了种属发育进行了鉴定。1材料1.1采样采样按照一般土壤样品采集方式进行，采样位置

7、北纬：37°41′；东经：107°31′；海拔：1307m。取地表5~15cm深度采样，装入无菌样品袋密封，实验室4℃保存。1.2试剂NaCl，Tris•HCl，MgSO4•7H2O，蔗糖，乳糖，糊精等均为国产分析纯；酵母膏，牛肉膏，蛋白胨，酪蛋白胨，麦芽糖，琼脂粉，可溶性淀粉等均为北京奥博星产品；细菌全基因组DNA提取试剂盒，2×PCRMasterMix(Tigan产品)。1.3培养基Gibbons培养基：酪蛋白胨0.75%，酵母膏1%，MgSO4•7H