冷鲜猪肉中甲单胞菌分离及其鉴定方法

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1、冷鲜猪肉中假单胞菌分离及其鉴定方法一.知识背景革兰氏染色机制：革兰氏染色反应与细菌细胞壁的化学组成和结构有着密切的关系。目前大多认为，经过染色和媒染之后，在细菌的细胞膜或细胞质上染上了结晶紫--腆的复合物。革兰氏阳性菌由于细胞壁较厚，肽聚糖网层次多，交联度高，结构较紧密，故用95%乙醇脱色时，肽聚糖网孔会因脱水而明显收缩，加上革兰氏阳性菌的细胞壁基木上不含脂类，乙醇处理时不能在壁上溶岀缝隙。因此，结晶紫--碘复合物仍被牢牢的阻留在细胞壁以内，使菌体呈现紫色。反之，革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，肽聚糖层薄，交联度低，结

2、构疏松，用乙醇来处理的时候，肽聚糖网孔不易收缩。同时，由于革兰氏阴性菌的外壁层脂类含量较高，当乙醇将脂类溶解后，细胞壁上就会出现较大缝隙为使其通透性增大，所以结晶紫--碘复合物就会被溶出细胞壁。这时再用番红等红色染液进行复染，这可使革兰氏阴性菌发细胞壁呈现复杂的红色，而革兰氏阳性菌则仍然呈现紫色。涂布T板法英文名为spreadplatemethod,由于将食菌材料现加到还较烫的培养基屮再倒平板易造成某些热敏感菌的死亡，而且采用稀释倒平台法也会使一些严格好氧菌因被固定在琼脂中间缺乏氧气而影响其生长，因此在微生物学研

3、究中更常用的纯种分离方法是涂布平板法。徒步平板法分离:由于需要分离的菌种是假单胞菌，所以选择的培养基只要实验室通用的牛肉膏蛋白胨培养基（简称普通肉汤培养基），先将己溶化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，将一定量的某一稀释度的样品悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂布棒将菌液均匀分散至整个平板表而，如果稀释得当，在平板表而就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖起来形成的。挑取单个菌落经移植培养或重复以上操作多次，即可获得纯培养。由于用涂布分离法主要缺点是涂布物问题和菌落重叠问题，所以我们要运用初

4、步的鉴定，再取儿个细菌进行初步的鉴定。假单胞菌是冷鲜猪肉中主要的腐败菌，属于细菌类，是一类革兰阴性菌，需氧，冷藏低温下能迅速生长。假单胞菌是直或微弯杆菌，单个，卵圆到短杆，有的长杆，极生鞭毛，可运动少数种不运动。菌苔不明显呈色，可产生水溶性色素。化能有机营养型，需氧，在自然界分布广。某些菌株具有很强的分解脂肪和蛋白质的能力。可在食品表面迅速生长，一般产生水溶性色素，氧化产物和粘液，引起食品产生异味及变质，很多在低温下能良好地生长，所以是冷藏食品腐败变质的主要原因。如荧光假单胞菌仔低温不可使牛肉，牛乳及乳制品腐败，

5、腐败假单胞菌可使鱼，牛奶及乳制品变质，可使牛奶的表面出现污点。主要用途为生产维生素C,抗生素和多种酶等。所以，在有氧冷藏条件下，假单胞菌可导致一些肉制品，乳制品，水产品等高蛋G含量的食品腐败变质，影响产品和货架期，造成经济损失，因此对假单胞菌的检测显的及其重要。一.报告目的通过此次的报告，能更加深入的了解细菌的结构及其基本特征，并且通过自学学习到细胞的分离技术及对细菌的鉴定方法，也学习到了革兰氏染色机制，并且会运用此机制来进行细菌的鉴定。并通过此次的报告学4到更多的食品微生物学技术。二.报告思路通过查找有关文献及

6、资料了解假单胞菌，在大概知道了假单胞菌之后，在通过书木上的知识进行假单胞菌的详细了解。利用假单胞菌的微生物学特性进行分离及培养，在利用书本上关于革兰氏染色的机制和与氧化酶的生化反应为阳性来确定是否为假单胞菌。!1!假单胞菌的特性:假单胞菌(Pseudomonas)为革兰氏阴性菌，直或微弯的杆状好氧性细菌，无芽孢，以极生鞭毛运动，有少数种不运动。假单胞菌属分布很广，在水、污水、土壤和空气中均存在，有的种对人、动物或植物有致病性。假单胞菌常常是导致肉品腐败的优势菌，假单胞菌属的焚光假单胞菌(Ps.fluorescen

7、s)、莓实假单胞菌（Ps.fragi）、隆德假革胞菌（Ps.lundensis）是最重要的肉制品腐败菌种。分离微生物菌种的初步鉴定:1.通过群体形态观察，获取单一纯种。在划线或稀释等培养后的平板上，挑取形态与FI的菌相同大小的单一菌落移接至固体斜面培养基，待做初步鉴定和保种用。2.细胞形态观察通过显微镜对细胞个体形态特征的观察，可以较方便地识别不同种类的微生物。3.细胞染色观察对形态上难以区分的微生物，通过细胞染色手段进行鉴别。例如，革兰氏染色反应就是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。它是通过细菌细胞壁的化学组成

8、不同而分为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌。某些细菌兵有芽孢，荚膜，鞭毛和异染颗粒等特殊结构，可利用特殊的染色法进行鉴别。4.生理生化性能鉴定生化反应通常用来鉴别在形态方面不易区别的微生物。它是根据各类微生物体内的酶系统和代谢产物的不同，通过生化反应测定微生物的代谢产物进而鉴别。例如，糖发酵实验，甲基红实验，吲哚实验等。5.生存环境测试每种微生物都有自己最佳的生存条件，包括温度