苦豆子内生放线菌资源及其生防作用评价

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1、独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得宁夏大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：乇目襄李暂时l'Bq：≯，；年r月；9日关于论文使用授权的说明本人完全了解宁夏大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印

2、、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意宁夏大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：谰支拍邕时间：少，；．年，月如曰导师签名：磁矽霞时间：矽B年r月扣曰项目资助国家自然科学基金《宁夏干旱荒漠区苦豆子内生菌多样性及其农用抑菌活性物质研究》(项目获批号：30960228)。宁夏回族自治区科技支撑计划项目《宁夏天然草场沙生药用植物内生放线菌多样性及其农用抗生素研究》摘要植物内生放线菌普遍存在于目前发现的各种陆生及水生植物中，其多样性受多

3、种因素的影响。不同的区域或位点、气候条件、植被等均可影响内生放线菌类群的多样性。研究发现，药用植物中蕴含着大量的有益内生放线菌，这些内生放线菌与宿主之间具有紧密的生态关系，其产生的次生代谢产物在医药、植物病虫害生物防治等方面的用途逐渐增大，成为寻找新的天然活性产物的重要方向。本文以宁夏干旱荒漠区重要的沙生药用植物苦豆子为研究对象，进行了内生放线菌的分离鉴定、多样性分析、高活性菌株的筛选及16SrRNA基因序列同源性分析，并对其生防作用作出评价。研究结果如下：l、从宁夏灵武白芨滩国家级自然保护区不同土壤类型、不同

4、优势植被的6个样区采集的健康苦豆子中，分离得到158株内生放线菌。同一植株不同组织中，内生放线菌数量以根部最多，其次为种子，叶部最少；淡灰钙土中苦豆子内生放线菌数量比风沙土中多；鉴定结果表明：内生放线菌以链霉菌属和诺卡氏菌属较多，其中链霉菌属以白孢类群为主。2、采用透明圈法对126株苦豆子内生放线菌进行分泌胞外酶活性检测，有71株内生放线菌具有酶活性，占总菌株数的56．3％。有8株菌株酶活性最为显著，其中菌株NDzKDS73、NDzKDS7对淀粉酶活性最高，透明圈半径达到24．62和19．12mm；菌株FJYK

5、DS5对蛋白酶活性高，透明圈半径16．94mm；菌株FJYKDSll、BJGKDS2对纤维素酶活性最高，透明圈半径为24．72和22．40mm；菌株FJJKDS2对几丁质酶活性最高，透明圈半径17．76mm；菌株NDZKDS24、NDZKDS20对葡聚糖酶活性最高，透明圈半径为12．06和10．50mm。通过形态特征和16SrRNA基因序列同源性分析，有7株活性菌株属链霉菌属(Streptomyces)，1株属拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)。3、以6种植物病原真菌为靶标菌采用皿内对峙法对126株苦豆子

6、内生放线菌进行了抗菌活性筛选，15株菌具有较高的抑菌活性(占11．9％)。其中菌株YWZKDS4对稻瘟病病菌的抑菌圈半径最大达到15．12mm；NDZKDS65对黄瓜枯萎病菌的抑菌圈半径最大达到18．54ram；菌株NDZI①S22具有广谱抗菌活性。根据菌株形态特征和16SrRNA序列分析，将3株菌株归入链霉菌属，菌株YWZI①S4、NDZI(DS22、NDZKDS65分别与Streptomycesscabiei、Streptomycesalbospinus和Streptomycescapillispirali

7、s亲缘关系最近，序列相似性分别为99．1％、96．4％和98．8％。4、选取28株苦豆子内生放线菌的代表菌株，对其分泌生长素(IAA)的能力和抑制杂草种子萌发的活性进行测定。结果表明：1株菌株NDZKDSl显色反应为粉红色，分泌生长素的能力较强；3株菌株YCZKDS3、FJJKDNl9、NDZKDS22的发酵液对杂草种子的萌发有明显的抑制效果。通过形态特征和16SrRNA基因序列同源性分析，1株具有分泌L蚣能力的菌株属拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)，3株发酵液具有抑制杂草活性菌株均属链霉菌属(Stre

8、ptomyces)。关键词：苦豆子，内生放线菌，生物活性，16SrRNA序列分析，鉴定AbstractEndophyticactinomyceteswerewidespreadintheallkindsofterrestrialandaquaticplantswhichhadcurrentlybeenfound．Itsdiversitywasinfluencedbymanyfactor