苦豆子内生放线菌产酶特性分析及活性菌株鉴定-论文.pdf

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1、·生物技术·北方园艺2013(16)：98～102苦豆子内生放线菌产酶特性分析及活性菌株鉴定胡美娟，周星辰，王丽，张伟，贾倩，顾沛雯(宁夏大学农学院，宁夏银川750021)摘要：以宁夏干旱荒漠区的126株苦豆子为试材，采用透明圈法对分离自其内生放线菌进行分泌胞外酶活性检测。结果表明：有71株内生放线茵具有酶活性，占总菌株数的56．3。其中有3株茵株酶活性最为显著，菌株NDZKDS7。、NDZKD具有的淀粉酶活性最高，透明圈半径达到24．62mm和19．12mm；菌株FJYKDS5具有的蛋白酶活性高，透明圈半径16．94mm；菌株FJ

2、YKDS、BJGKDS2具有的纤维素酶活性最高，透明圈半径为24．72rnlTl和22．40rnH1；菌株FJJKDSz具有的几丁质酶活性最高，透明圈半径17．76rllm~菌株NDZKDS~、NDZKDS2。对葡聚糖酶活性最高，透明圈半径为12．06inlrl和10．50nllTl。通过形态特征和16SrRNA基因序列同源性分析，有7株活性菌属链霉菌属(Streptomyces)，1株属拟诺卡氏菌属(Nocardiopsis)。关键词：苦豆子；内生放线菌；产酶活性；鉴定；16SrRNA序列分析中图分类号：S503．53文献标识码：

3、A文章编号：1001-0009(2013)16一()(]98一O5放线菌一直是抗生素、酶和酶抑制剂等有用生理活苦豆子(SophoraalopecuroidesL)为我国北方荒性物质的主要产生菌¨】]。迄今为止，微生物产生的2万漠、半荒漠地区重要的沙生药用植物，其功效主要有清多种生物活性物质，45以上是由放线菌产生的_2]。近热解毒、驱风燥湿、抗菌杀虫、抗肿瘤、免疫等，具有独特年来，由于已知化合物重复发现的概率越来越高，促使的民族药用历史，是研究沙生药用植物内生放线菌及其人们寻找更为有效的新的生物活性物质]。因此越来活性代谢产物的绝好

4、材料]。目前国内外在苦豆子内越多的研究者开始关注并研究新栖息地的微生物，如盐生放线菌方面的研究还鲜见报道。碱等各种极端环境、海洋及植物内生环境等。该研究在前期对苦豆子内生放线菌分离、鉴定及多植物内生放线菌是一类相对未开发的新微生物资样性研究的基础上，对其产酶特性进行了分析，旨在筛源。秦盛等[4研究表明植物内生放线菌长期生活在植选高活性产酶菌株，并进行分子生物学鉴定，以期得到物体内微环境中，并与之协同进化，一方面植物为内生新的放线菌物种资源及产功能物质的活性菌株，为苦豆放线菌提供光合作用的产物和矿物质，另一方面内生放子内生菌的开发利用

5、奠定基础。线菌的代谢产物能刺激宿主植物的生长发育，提高宿主1材料与方法植物对生物胁迫和非生物胁迫的抵抗能力。这种特殊1．1试验材料的生态环境决定了物种的特殊性，新物种必定有新基2010年6月和1O月，从宁夏灵武白芨滩国家级自因，新基因必然有新产物_5]。药用植物作为一类特殊的然保护区6个样区，每样区用5点“Z”型方法，采集健植物，其内生环境不同于一般植物，其内生放线菌在与康苦豆子植株和豆荚，植株保鲜袋4℃保存。分别于它们协同进化过程中，可能产生新的基因及代谢产物。采集后3～4d内按根、茎、叶3个部位分离内生放线菌。豆荚剥离后，随机选

6、取饱满圆润、无病虫伤的籽粒进行第一作者简介：胡美娟(1987一)，女，宁夏银川人，硕士研究生，研究内生放线菌分离。方向为生物防治及微生物资源利用。E—mail：598315218@蛋白胨蔗糖琼胶培养基(NA)、高氏1号培养基qq．corn．(GA)、马铃薯葡萄糖琼胶培养基(PI)A)、燕麦琼胶培养责任作者：顾沛雯(1969一)，女，宁夏银川人，博士，教授，现主要从基(OA)和植物汁液培养基，成分及配制参照顾沛雯等事植物病理学的教学与科研工作。E-mail：gupeiwen2005@yahoo．的方法。COITLcn．基金项目：国家自

7、然科学基金资助项目(30960228)；宁夏科技支撑1．2试验方法计划资助项目(2OO77B02)；宁夏自然科学基金资助项目1．2．1苦豆子内生放线菌的分离与培养称取苦豆子(nzlO02)。样品约1～2g，种子用50HSO4浸泡4～5h软化种收稿日期：2013—04—1O皮，用清水冲洗数次，催芽3～5d后，在超净台中无菌水98北方园艺2013(16)：98～102·生物技术·清洗数10次，用75酒精浸泡30S，再用5的次氯酸(25pmo1)0．5laL；模板DNA(30／~g／L)1．0I；双蒸水补钠浸泡3min后，立即用无菌水洗涤

8、3～5次，加入5mL足至50I。PCR反应条件为：94℃、4min；95℃、1min；无菌水，采用组织匀浆法分离内生放线菌，最后一遍无55℃、1min；72℃、2min、30个循环；72℃、10min。用菌水洗涤液涂板检测有无杂菌污染