海洋微生物脂肪酶YS2071稳定性、固定化及其性能研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M150208358上海海洋大学硕士学位论文海洋微生物脂肪酶YS2071稳定性、固定化及其题目：性能研究StudyonStability,ImmobilizationandPropertiesof英文题目：LipasefromMarineMicroorganismYS2071专业：食品科学与工程研究方向：海洋产物资源与酶工程姓名：张士恒指导教师：孙谧研究员二O一八年五月十七日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经

2、明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：

3、日期：年月日日期：年月日I上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注王春波青岛大学教授主席刘万顺中国海洋大学教授委员韩宝芹中国海洋大学教授委员韩志武青岛大学教授委员姚如永青岛大学教授委员于文功中国海洋大学教授委员吴文惠上海海洋大学教授委员王伟黄海水产研究所副研究员秘书答辩地点黄海水产研究所1号楼4楼会议室答辩日期2018年5月22日II上海海洋大学硕士学位论文海洋微生物YS2071脂肪酶稳定性、固定化及其性质研究摘要脂肪酶是一种能够对长链甘油酯进行催化并使其发生水解的酶。脂肪酶独特的界面激活特性及立体选择性使其在有机合成、食品营养成分改良

4、以及生物能源等行业中有着广泛的应用前景，酵母、细菌和真菌等微生物都可以生产脂肪酶。本文所研究的脂肪酶是一种来源于海洋微生物YS2071的碱性脂肪酶，本文对该脂肪酶的液体酶稳定性进行研究并得到一种稳定剂配方，以聚苯乙烯微球为载体采用物理吸附的方法对脂肪酶进行固定化，对固定化条件进行优化，并探究了固定化后的酶的性质，研究结果分述如下：液体脂肪酶稳定性研究：采用升温加速方法，考察影响海洋微生物YS2071液体脂肪酶活力稳定性的各种因素，研究该酶的失活动力学模型，优选出提高酶活稳定性的添加剂，进行正交实验，得到复合稳定剂的较佳配方，配方为：甘油含量6%，山梨醇含量9%，果糖含量9%，苯甲酸

5、钠含量1.7%，氯化钙浓度15mM，山梨酸钾含量0.5%，最稳定pH为9。稳定剂配方的加长时效试验表明，加入该配方后，液体脂肪酶YS2071在25℃放置90天的酶活保留率达91.29%，和不添加保护剂的对照样品相比，酶活保留率提高70.1%，极大地提高了该液体脂肪酶的稳定性。以聚苯乙烯微球为载体固定化脂肪酶：尝试了不同基团和不同粒径大小的聚苯乙烯微球进行脂肪酶固定化的筛选，实验结果显示粒径为0.6-1μm氨基聚苯乙烯微球有最佳的固定化效果，并选取该氨基聚苯乙烯微球对脂肪酶进行吸附。使用该氨基聚苯乙烯微球进行脂肪酶III上海海洋大学硕士学位论文固定化的最佳条件为:加酶量5mg/mL，

6、pH为10，温度20℃，固化时间6h，震荡速率250rpm/min。最终酶活回收率达到42.82%。固定化脂肪酶性能研究：和游离酶相比，固定化脂肪酶的稳定性明显增强，尤其表现在温度稳定性、pH稳定性明显增强，对有机溶剂以及金属离子的耐受性明显提高；25℃储存30天，与游离酶相比酶活保留率提升15.09%；固定化酶重复利用5次后，相对酶活还保留有63.77%，重复使用10次后，其相对酶活仍保留有29%，有更加良好的操作稳定性。关键词：海洋脂肪酶，储存稳定性，正交实验，固定化，酶学性质IV上海海洋大学硕士学位论文StudyOnStability,ImmobilizationAndPro

7、pertiesOfLipaseFromMarineMicroorganismYS2071ABSTRACTLipase(EC3.1.1.3)isanenzymewhichcancatalyzesthehydrolysisoflongchainglycerides.Theuniqueinterfaceactivationcharacteristicsandstereoselectivityoflipasesmakethemhaveawiderangeofapplicati