表达禽呼肠孤病毒σb、σc蛋白的重组马立克氏病毒的构建

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1、分类号学号ＭＺ１２４８ＱＵＤＣ密级媛叫义參ｈＹＡＮＧＺＨＯＵＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＩ硕去学隹冷文（专业型）表达禽呼肠孤病毒ｏＢ、ｏＣ蛋白的重组马立克氏病毒的构建夏菁２２５００９指导教师姓名，扬州大学，江苏损州，：吴艳涛教授申请学位级别；硕去学科专业名称：兽医硕壬曰论文提交日期：２０１５年６月论文答辩日期：２０１５年６月３学位授予单位州大学学位授予日期：２０１５年６月３０曰：扬答辩委员会主席：戴亚斌研究员２０１５年６月表达禽呼肠孤

2、病毒ｏＢ、ａＣ蛋白的重组马立克巧病毒的构建，Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆ民ｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＭａｒｅｋｓＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓｅｓＥｘｒｅｓｓｉ打化ｅａＢａｎｄａＣｒｏｔｅｉｎｓｏｆＡｖｉａｎ民ｅｏｖｉｍｓｐｇｐ研究生：夏菁专业：兽医硕±导师：吴艳涛教授扬州大学兽医学院２０１５年６月：表达禽呼胺孤病毒ｏＢ夏菁、ｏＣ蛋白的重组马立克氏病毒的构建１表达禽呼肠孤病毒ｃｊＢ、ａＣ蛋白的重组马立克巧病毒的构建研究生：夏菁导リ巾：吴艳涛教授摘

3、要禽呼肠孤病毒（Ａｖｉａｎｒｅｏｖｉｒｕｓ，ＡＲＶ）感染可Ｗ引起的鸡和火鸡的ｔｉｌ关节炎、键銷炎、吸收障碍为特征的免疫抑制病。该病可导致鸡的死ｔ率增加、病鸡増重减少、饲料转化率下降、产蛋下降、般化率／受精率降低，给养禽业带来巨大经济损失。国内外的研究表明目前使用的弱毒疫苗一Ｓ１１３３仍可能具有定的致病性，因此研制安全、有效的新型疫苗对ＡＲＶ感染的防控具有重要意义。－－Ｍ本研究采用ＲＴＰＣ民扩増ＡＲＶＧＸ／２０１ＣＶ１株的地、ａＣ基因，定向克隆至ｐＥＡＳＹｌ表达载体中；再分别将ｃｊＢ

4、、ａＣ基因的表达盒与含有马立克氏病毒（ＭＤＶ）ＣＶＩ９８８疫苗Ｄ－毒株ｓｏｒｆｌ／ｓｏ泡序列ｐＵ／载体相连，构建含（ｊＢ、ｃｊＣ基因的转移载体质粒ｐＵ／Ｄ地和－Ｄ－－ＶｐＵ／ＤｃｒＣ。分别将ｐＵ／ｄＢ和ｐＵ／ＤｏＣ与含有Ｇ巧报告基因的ＭＤＶＣＩ９８８基因组ＤＮＡ邸－ＭＤＶ－－－憐酸巧沉淀法共转染Ｃ细胞，通过筛选、纯化获得重组病毒ｒ口Ｂ和ｒＭＤＶＧＣ。经ＰＣ民、Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ和ＩＦＡ分析，ａＢ、口Ｃ基因分别正确插入到ＭＤＶＣＶＩ９８８毒株基因组中，并可Ｗ成功表达ＡＲＶ油蛋白和（ｔＣ蛋

5、白。－－－－本研究评价了１日龄ＳＰＦ鸡接种重组病毒ｒＭＤＶ口Ｂ和ｒＭＤＶｏＣ后对ＡＲＶＧＸ／２０１（Ｖ１株及ＭＤＶＲＢ１Ｂ超强毒株的免疫保护效力。将７０只１日龄ＳＰＦ鸡随机分成５－－组：ｒＭＤＶａＢ免疫组、ｒＭＤＶｃｒＣ免疫组、Ｓ１Ｂ３疫苗免疫组、非免疫攻毒对照组和健康对照组，从发病率、死亡率、临床症状、病理组织学变化、对增重的影响和抗体水平等方面评价免疫效为。前两组的试验鸡１日龄时分别颈部皮下接种５０００空斑形成单位（ＰＦＵ）－ＭＤＶ－－－的油和ｒＭＤＶ口Ｃ，第Ｈ组于７日龄接种１羽份

6、的Ｓ１Ｄ３疫苗２１日龄时ｒ；，前四组试验鸡均用４１０化１〇５〇／鸡的ＡＲＶＧＸ／２０１（Ｖ１毒株攻击４。，攻毒第１天进行剖杀结果盈示ｒＭＤＹ－Ｂ免疫组ＭＤＶ－ＡＲＶｃｊ和ｒｃｒＣ免疫组在攻毒后的发病率分别为４０％和２６．７％与非免＜０？疫攻毒对照组发病率１００％存在显著差异出．０５１日日齡）；攻毒前后口龄３５各免疫组增）＞－ＭＤＶ－重差异不思著皮〇．〇５，但Ｓ１１３３疫苗组和ｒＭＤＶａＢ免疫组增重小于ｒ口Ｃ免疫组。）－曰Ｃ免疫组的脾脏病变较Ｓ－ｏＢ免疫组经临床检查，攻毒后ｒＭＤＶ１１３３

7、疫苗免疫组和ｒＭＤＶ轻微。Ｉ扬州大学硕±学位论文－－－ＭＤＶ－ＭＤＶ本研究还评价了ｒｃｊＢ和ｒｃＣ分别对ＭＤＶＲＢ１Ｂ超强毒株攻击的免疫保－８０ＤＶ、－旅免疫护效果。将只１日龄ＳＰＦ鸡随机分为４个试验组；ｒＭｏＢ免疫组ｒＭＤＶ－－地免疫组组、ＣＶＩ９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ免疫组和攻毒对照组，每组２０只试验鸡；ｒＭＤＶ、ｒＭＤＶｃｒＣ免疫组和ＣＶＩ９８８／Ｒｉｓｅｎｓ免疫组的试验鸡分别于１日龄时颈部皮下接种５０００ＰＦＵ／鸡的相ｐ应疫化７日龄时，所有试验鸡经腹賠接种５００ＰＦＵ／鸡

8、的ＭＤＶＲＢ化超强毒株。连续观察－－９０天，记录各试验组鸡的发病和死亡情况。ｒＭＤＶｏＢ免疫姐和ｒＭＤＶｃｒＣ免疫组对ＭＤＶＲＢ１Ｂ强毒株攻击能够提供完全保护，与ＭＤＶＣＶＩ９８８／Ｒｉｓｐｅｎｓ免疫組的效果相当。综上－所述，本研究构建的重组病毒ｒＭＤＶｃｒＣ是较理想的新型疫苗候选毒株。关键词：禽呼肠孤病毒；马立克氏病毒；同源重组；保护效为、夏菁＝表达