水稻抗黑条矮缩病相关mirna鉴定及功能分析

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2、．寅水稻抗黒条矮缩病相关ｍｉＲＮＡ鉴定及功－－Ａ／’’Ｊ一Ａ＇：．心＊户＾■冷广■■研究生：古姻ｆｅ舞巧，拾导教师周益笔．递援＿＿茜貧４勢＇＜接＾；秦单：检：＃生論科学学院写：奮．戰―＇．＇＂．■．甲＼：．三：．．沪＇；．户＂＂，專象学科：＞生物学，？篆二级学科：术．＾完成时巧、２１５年４月２０百Ｘ／；■、—■，．．■＾＂＇２０１５年５巧巧日；．答辩时间＇＇■．．．．＾．：．．，，ｙ：１－

3、■，，一．■－；：＇，、Ａ—Ｖｉ．广■学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果。本论文中除引文外、，所有实验数据和有关材料均是真实的。本论文中除引文和致谢的内容外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了声明并表示了谢意。学位论文作者签名：秦堆］義日期：劝Ｓ＾学位论文使用授权声明研究生在校攻读学位期间论文王作的知识产权单位属南京师范大学。学校有权保存本学位论文的电子和纸质

4、文档，可Ｗ借阅或上网公布本学位论文的部分或全部内容，可Ｗ采用影印、复印等手段保存、汇编本学位论文。学校可Ｗ向国家有关机关或机构送交论文的电子和纸质文档，允许论文被查阅和借阅。（保密论文在解密后遵守此规定）保密论文注释：本学位论文属于保密论文：，密级保密期限为。年：麥学位论文作者签名指导教师签名；曰期：孤９乂日期：碟；乂，Ａ摘要水稻黑条矮缩病（ＲＢＳＤＶ）是近年来我国华东稻区最为严重的水稻病毒病害，严重影响水稻产量的提高。利用植物自身抗性培育抗性品种是防治该病毒病的根本策略。

5、ＲＮＡ沉默机制是植物抵御病毒侵染的重要途径，ｍｉＲＮＡ是其中关键性的负调控因子，生，广泛调控植物基因表达长发育和逆境胁迫响应等各个生物途径。本研究在筛选出的抗感ＲＢＳＤＶ水稻品种的基础上构建小ＲＮＡ文库，并通过高通量测序和生物信息学分析获取在抗病和感病品种中胁迫相关水稻ｍｍｉＲＮＡ在水稻ｉＲＮＡ，并通过对郎基因的预测和功能分析阐述接种病毒后对植株的生长发育Ｗ及抗病相关途径的影响。本研究通过人工接种鉴定方法鉴定９０个水稻品种得到了相对抗病品种９３１１和感病品种日本晴，并Ｗ此为材料构建侵染前后抗感品种的茎巧及叶片小ＲＮ

6、Ａ文库共８个。利用商通量测序与生物信息学分析筛选得到很多与水稻黑条矮缩病胁迫相关ｍｉＲＮＡ，结合Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交、焚光定量等方法对部分ｍｉＲＮＡ及其範基因进行表达检测分析，得到主要结果如下：？１．８个文库获得的小ＲＮＡ序列总数在４７９５８３３５６９７８７９之间，其中与水稻３０－基因组匹祀数在．４８％４５．９７％之间。水稻黑条矮缩病胁迫后，样本间ｍｉＲＮＡ差异表达茎杆和叶片全部下调的数目为３８个，全部上调的数目为１２个；％１１上调Ｎｉｐ下调的数目为３１个，９３１１下调Ｎｉｐ上调的数目为１个，叶片上调茎杆下调

7、的数目为９个，叶片下调茎巧上调的数目为１８个。２．在表达显著的ｍｉＲＮＡ中挑出１４个差异表法显著的ｍｉＲＮＡ，送些ｍｉＲＮＡ分别隶属于１４个ｍｉＲＮＡ家族。通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交验证试验，得到ｍｉＲｌ％和ｍｉＲ１６８的杂交条带，其中％１１叶片在胁迫后ｍｉＲｌＷ的表达量明显増加，茎轩在胁迫后ｍｉ民１５６的表达量増加，日本晴叶片在胁迫后ｍｉＲ１５６的表达量明显减少，茎杆在胁迫后ｍｉＲＫ６的表达量増加。而ｉｎｉＲ１６８在胁迫后叶片和茎巧表达量没有发生明显变化。３．对１４个表达丰度高的ｍｉＲＮＡ中的１３个ｍｉＲＮＡ所预测

8、到的１８个飽基因ＲＴ－ＰＣＲ分析进行ｑ，结果挑选了９个表达水平大致与对应ｍｉＲＮＡ呈现相对应的负调控变化的祀基因。对这些ｍｉＲＮＡ进行分析发现，ｍｉＲ１６