鸭甲肝病毒1和3型一步法双重rt-pcr检测方法的建立及应用

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4、它教育机构的学位或证书所使用过的材料一。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。＇研究生签名：心合年＾月／巧关于论文使用授巧的声明本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定，目Ｐ：学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可レッ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。Ｉ／本论文不保密。□本论文俱密，在年解密后适用本Ｉ＿

5、＿授权。＂＂（请在上□内划Ｖ）研巧；生签名：广年月／Ｔ曰Ｊ导师签名：Ｉｔ而ｔｅ（巧６月（ｒ日ｃＰｏ四川农业大学硕±学位论文中文摘要一鸭病毒性肝炎（ＤＶＨ）是锥鸭的种急性传染性病，主要侵害４周龄Ｗ内的维鸭。该病由至少Ｈ种不同的病原引起，包括鸭甲肝病毒（ＤＨＡＶ）、１型鸭星状病毒－－２（ＤａｓｔＶ１）和２型鸭星状病毒（ＤａｓｔＶ）。分布范围最广的ＤＨＡＶ属于小ＲＮＡ病毒－科禽肝病毒属。基于中和试验和系统发育分析，ＤＨＡＶ已被分为Ｈ种基因型（ＤＨＡＶ１、－－－－２和ＤＨＡＶ３）ＤＨＡＶＤＨＡＶ。其中

6、，１分布范围最广泛，ＤＨＡＶ２仅在台湾发现报道，ＨＡＶ－３已Ｖ－而近几年Ｄ经给我国大陆地区和韩国的养鸭业造成严重危害。ＤＨＡ１与－－－ＤＨＡＶ３之间交叉保护作用不明显ＤＨＡＶ２之间无交叉中和反应，ＤＨＡＶ１和。通过对錐鸭的临床症状和剖检病变可１＾＾刀步对ＤＶＨ进行诊断，但是该方法不能够区分－－ＤＨＡＶ３ＤＨＡＶ１和。目前血清学诊断技术和分子生物学诊断技术已经用ＤＨＡＶ的检测和诊断，血清学诊断技术主要包括中和试验、间接血凝试验、琼脂扩散试验和免疫巧光抗体技术等，但是由于其繁琐耗时和成本高，不能用于快速诊断。分子生物学

7、诊－－ＰＣＲ和ＲＴＬＡＭＰ方法等断技术包括ＲＴ，能够快速特异地对ＤＨＡＶ分离株和临床样一一ＡＶ－ＡＶ－品进行诊断，因此建立种能够快速鉴别诊断ＤＨ１和ＤＨ３的步法双重ＲＴ－ＰＣＲ方法对ＤＶＨ的防治我国有积极的作用。一ＲＴ－－－１．建立步法双重ＰＣＲ方法用于检测ＤＨＡＶ１和ＤＨＡＶ３－－ＤＨＡＶ－ｅｎ为了能够快速鉴别诊断１和ＤＨＡＶ３，本研究根据ＧＢａｎｋ中ＤＨＡＶ１－－ＡＶ３ＡＶ－ＡＶ２和ＤＨ的全基因组序列，在ＤＨ１和ＤＨ３的基因保守区域分别设计了一－－Ｖ－对特异性引物ＰＣＲ方法鉴别诊断ＤＨＡＶ１３。，并成

8、功建立步法双重ＲＴ和ＤＨＡ一－－－ＰＣ民方法能够分别针对ＤＨＡＶＤＨＡＶ３９９２ｂ该步法双重ＲＴ１和特异性地扩增出ｐ和１５３３ｂｐ的目的片段，而对健康维鸭肝脏组织、番鸭细小病毒、鸭癌病毒、