渝产续断多糖超声波辅助提取工艺优化

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1、渝产续断多糖超声波辅助提取工艺的优化-农学论文渝产续断多糖超声波辅助提取工艺的优化张丹１，陶燕铎２，谈利红１，余保１，颜学伟１，曹纬国１（１．重庆医科大学中医药学院，重庆４０００１６；２．中国科学院西北高原生物研究所，西宁８１００００）摘要：为建立渝产续断（Ｄｉｐｓａｃｕｓａｓｐｅｒｏｉｄｓ）多糖的最佳超声波辅助提取工艺，设计正交试验，以续断多糖的提取率为评价指标，对续断多糖的超声波辅助提取工艺参数进行考察。结果表明，最佳超声波辅助提取工艺为料液比１∶２０（ｇ∶ｍＬ），提取时间60min，提取４次，测得续断多糖的平均提取率为７．４７２％，ＲＳＤ为２．１２％，表明续断多

2、糖超声波辅助提取工艺稳定，质量可控。关键词：续断（Ｄｉｐｓａｃｕｓａｓｐｅｒｏｉｄｓ）；多糖；正交试验；超声波辅助中图分类号：Ｓ５６７．２３＋９；Ｒ２８４．２文献标识码：Ａ文章编号：０４３９－８１１４（２０１５）０２－０431－０３ＤＯＩ：１０．１４０８８／ｊ．ｃｎｋｉ．ｉｓｓｎ０４３９－８１１４．２０１５．０２．０44续断为川续断科植物川续断（Ｄｉｐｓａｃｕｓ7/7ａｓｐｅｒｏｉｄｓ）的干燥根［１］，又名川断，具有补肝肾、强筋骨、续折伤、止崩漏、安胎等功效，主要用于胎漏、胎动不安、滑胎、腰膝酸软、跌打损伤和骨折等症。续断化学成分研究已较为深入，且多集中于其皂苷类成分

3、［２，３］，已有研究表明续断类药材多糖含量较高，重庆作为续断的主产区之一，目前尚未有关于重庆产续断多糖的研究报道。多糖尤其是中药多糖具有增强机体免疫功能及抗肿瘤等药理作用，因此续断药材中含量较高的多糖类成分具有潜在的研究价值。本试验以重庆产续断为原料，采用正交试验法优选续断多糖的超声波辅助提取工艺，为续断多糖的深入研究奠定基础。１材料与方法１．１材料与仪器续断药材采自重庆武隆后坪乡，经重庆医科大学王刚副教授鉴定为川续断。ＵＶ－１７５０型紫外可见分光光度计（岛津仪器有限公司）；ＨＨ－６型数显恒温水浴锅（金坛市荣华仪器制造有限公司）；ＡＬ２０４型电子分析天平（瑞士梅特勒托

4、利多集团）；ＫＨ５２００ＤＡ型数控超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司），ＤＧＧ－９２４０Ａ型电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）。葡萄糖标准品（中国药品生物制品检定研究院提供，批号为１１０８３３），浓硫酸、正丁醇、氯仿、丙酮、无水乙醇、９５％乙醇、石油醚、纯净水等均为分析纯。１．２试验方法１．２．１标准品溶液的配制室温下精密称取干燥至恒重的葡萄糖标准品５１．８ｍｇ，置５０ｍＬ容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀即得。１．２．２供试品溶液的制备称取已烘干的续断药材粉末１０ｇ，置圆底烧瓶中加入８０ｍＬ石油醚回流提取脱脂，共计２次，每次２ｈ。药渣挥去溶剂后，加

5、入８０ｍＬ９５％乙醇回流提取２次，每次１．５ｈ，药渣挥去溶剂后，加水２００ｍＬ，１００℃水浴提取５次，每次２7/7ｈ，合并提取液，浓缩并定容至１０００ｍＬ，即得供试品溶液。１．２．３标准曲线的制备吸取上述标准品溶液０、０．５、１．０、２．０、４．０、５．０ｍＬ于５０ｍＬ容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，得系列葡萄糖标准品溶液。各吸取０．５ｍＬ置于１０ｍＬ具塞试管中，再分别加入５％苯酚１．０ｍＬ，摇匀后迅速加入浓硫酸４．０ｍＬ，摇匀后３０℃水浴３０ｍｉｎ，冰水浴冷却１５ｍｉｎ，在４８９ｎｍ下测定其吸光度，以吸光度Ａ为纵坐标，葡萄糖标准品浓度Ｃ为横坐标制作标准曲线［４，５］

6、。１．２．４正交试验设计［６，７］选定影响多糖提取率的料液比（ｇ∶ｍＬ，下同）、提取时间以及提取次数作为考察因素，以多糖提取率作为考察指标，选用Ｌ９（３４）正交表安排试验考察各因素的影响，因素与水平见表１。２结果与分析２．１最大吸收波长的确定精密量取供试品溶液与标准品溶液各０．０５ｍＬ，置５ｍＬ容量瓶中，分别加１．０ｍＬ去离子水、４％苯酚溶液１．０ｍＬ，摇匀，加入浓硫酸５．０ｍＬ，４０℃水浴加热１５ｍｉｎ，置冰水浴中冷却５ｍｉｎ，以相应的试剂为空白，同时制备供试品与标准品的未显色样品，按照紫外可见分光光度法，在２００～８００ｎｍ范围内进行光谱扫描，续断多糖与葡萄糖样品

7、显色后均在４８９ｎｍ处有最大吸收，且对应未显色样品在４８９7/7ｎｍ处基本没有吸收，结果见图１。因此选择４８９ｎｍ为测定波长。２．２标准曲线的绘制精密吸取上述标准品溶液０、０．５、１．０、２．０、４．０、５．０ｍＬ于５０ｍＬ容量瓶中，加去离子水稀释至刻度，得系列葡萄糖标准品溶液。以吸光度Ａ为纵坐标，葡萄糖标准品浓度Ｃ为横坐标进行线性回归，得到标准曲线为：Ａ＝７．８７Ｃ＋０．００４３６，ｒ＝０．９９９３，结果表明，葡萄糖浓度在０．０１０３６～０．１０３６０ｍｇ／ｍＬ范围内线性关系良好。２．３正交试验结果以续断多糖的提取率为评价指标，筛选续断多糖的超声波