石蜡切片方法交流讨论

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1、石蜡切片步骤一、目的要求：简要介绍石蜡切片的制作和苏木精、曙红染色法（简称H.E染色法），借以了解石蜡切片制作的基本原理和一般方法。二、实验用具：解剖器一套、单面刀片、切片刀、切片机、载玻片、盖玻片、标本瓶、烧杯、量筒、漏斗、染色缸、树胶瓶、酒精灯、毛笔、绘图纸、滤纸、熔蜡箱（或恒温箱）、展片台（或烫板）、小木块、蜡带盒、烤片盒、切片托盘。三、实验材料：蛙或小白鼠。四、实验内容：（一）药品：１、７０％、８０％、９０％、９５％酒精及无水酒精：９５％以下的各级浓度酒精是用９５％酒精加蒸馏水稀释而成。简单的稀释方法：

2、所需稀释的浓度是多少，就量取多少毫升原浓度的酒精，再加蒸馏水至该酒精的原浓度即可。例如，配制７０％酒精，就量取７０ml９５％酒精，然后加入２５ml蒸馏水即成。２、固定液：　常用的固定液有１０％福尔马林、Bouin氏液和Zenker氏液等。Bouin氏液在组织学切片技术方面应用甚广，配方如下：　苦味酸饱和水溶液７５ml　福尔马林　　２５ml　冰醋酸　　５ml３、蛋白甘油：蛋白甘油是粘贴蜡片用的粘片剂。配方如下：取一新鲜鸡蛋的蛋白，充分搅拌成雪花状泡沫，然后滤去泡沫，加入等量甘油，搅拌均匀，再加入一小粒麝香草酚防腐

3、。４、染色液：　以H.E.染色法为例，需配制苏木精染液和曙红染液。⑴、苏木精染液：苏木精是一种碱性染料，它可将染色质染成蓝紫色。配方有多种，现介绍Harris氏苏木精的配制：甲液：苏木精　　０.５g９５％酒精　　　５.０ml乙液：硫酸铝钾（或硫酸铝铵）１０g　蒸馏水　　　１００ml　氧化汞　　　　０.２５g　冰醋酸　　　　几滴　先将甲液溶解，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中，并加热使溶解，然后将两液混合煮沸，离开火焰后缓缓加入氧化汞。冷却后过滤，加入几滴冰醋酸即成。⑵、０.５％曙红酒精溶液：即０.５g曙红溶于１００ml

4、９５％酒精中。曙红是一种酸性染料，它可使多种细胞的细胞质染成粉红色或红色。５、盐酸酒精：盐酸酒精用于分色。配制方法是在１００ml７０％酒精中加入１ml盐酸。６、其它：　二甲苯、切片石蜡、中性树胶等。（二）、操作步骤：　进行组织学研究，必须把活的组织或器官制作成切片标本，以便在显微镜下进行观察。切片标本也就是利用组织的不同结构，经过染色后呈现出不同的颜色和不同的折光率而制作的。制片的方法众多，但基本要求是尽量保持结构的真相，切成薄的切片，应用不同的染色方法，使内部结构清晰易见。　石蜡切片法是最常用的一种制片法。其

5、制作过程是：取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→烤片→脱蜡→复水→染色→脱水→透明→封藏。现分述如下：１、取材和固定：固定的目的在于保存组织内细胞原有的结构和形态，使其与生活时相似，因此要求固定的材料越新鲜越好。把动物杀死后应立即割取组织块，并快速投入固定液中。将蛙或小白鼠快速剪去头部，打开腹腔，用锐利的刀片割取小块组织（肝、肠等）。组织块的大小以厚度不超过５mm为宜。然后，将取下的组织块迅速投入Bouin氏固定液中。固定时间为数小时至２４小时（需视组织块的大小而定）。２、冲洗：经固定的材料，

6、可根据不同的固定液，分别用水或酒精冲洗，以洗去固定液，否则固定液留在组织会有碍染色.　用Bouin氏液固定的材料,可直接移入70％酒精中，多换几次酒精，直至无黄色时为止。也可在酒精中加入几滴氨水或饱和碳酸锂溶液，以迅速洗去黄色。但留少许黄色也无妨碍。　浸洗后的材料若暂时不制片，可保存于７０％酒精中。３、脱水：　柔软并含有多量水分的组织是易切成薄片的，故必须增加组织的硬度。石蜡切片法就是使石蜡渗入组织，以达到支持增硬的作用。但水与石蜡是不相混合的，因此，在浸蜡、包埋前须将组织中的水分完全除去，这一步骤即为脱水。　

7、常用的脱水剂是酒精。脱水时，先从低浓度的酒精开始，然后，递增浓度，直至无水酒精。具体方法是，将材料经７０％酒精→８０％酒精→９５％酒精（Ⅰ）→９５％酒精（Ⅱ）→无水酒精（Ⅰ）→无水酒精（Ⅱ），各级酒精１－２小时。脱水应彻底，否则材料不能透明，影响石蜡的浸入，致使难以切片。４、透明：酒精与石蜡不能混和，因此，脱水后的材料在浸蜡前，还必须经过透明。透明剂既可替代组织中的酒精，又能溶解石蜡，以利石蜡的渗入。二甲苯是常用的一种透明剂。将脱水后的材料经１：１无水酒精与二甲苯→二甲苯（Ⅰ）→二甲苯（Ⅱ），各级时间为０.５－

8、２小时，务使组织达到透明为止。５、浸蜡：　将已透明的材料移入熔化的石蜡内浸渍即为浸蜡。其目的是去除组织中的透明剂，而使石蜡渗入整个组织，获得一定的硬度和韧度，以便切成薄的切片。先将装有５６－５８℃石蜡的三个蜡杯放在熔蜡箱内熔化，并使熔蜡箱的温度保持恒定（约５８℃），切勿太高或太低。然后将透明了的材料放入蜡杯（Ⅰ）→蜡杯（Ⅱ）→蜡杯（Ⅲ）。浸蜡时间视材料大小而定，一般总的浸蜡时间为２－４