DB21T 2752-2017 几丁寡糖含量的测定 液相色谱法

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1、ICS71.040.01A43DB21辽宁省地方标准DB21/T2752—2017几丁寡糖含量的测定液相色谱法2017-02-23发布2017-03-23实施辽宁省质量技术监督局发布DB21/T2752—2017前言本标准是依据GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草的。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由中国科学院大连化学物理研究所提出。本标准由大连市质量技术监督局归口。本标准起草单位：中国科学院大连化学物理研究所。本标准主要起草人：陈玮、赵勇、尹恒。IDB21/T2752—2017几丁寡糖含量的测定

2、液相色谱法1范围本标准规定了用液相色谱法测定几丁寡糖含量的原理、仪器和设备、试剂和材料、测定步骤、结果的计算和重复性。本标准适用于几丁寡糖含量的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理几丁寡糖溶液在波长195nm处有最大的吸收峰，在一定范围内，峰面积与几丁寡糖的浓度成正比关系。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪：配有二极管阵列检测器或紫外检测器。4.2分析天平：感应量为0.0001g。4.3滤膜：聚四氟乙烯膜

3、，0.2μm。4.4恒温干燥箱。5试剂和材料5.1水：GB/T6682规定的一级水。5.2乙腈：液相色谱级。5.3乙腈溶液：分别量取700mL乙腈（5.2）与300mL水（5.1），混合后所得溶液。5.4几丁寡糖标准品：纯度≥90%，聚合度为n（n=2-6），结构式参见附录A。5.5标准溶液：称取25.0mg经105℃干燥4h的几丁寡糖标准品(5.4)于烧杯中，加入25.0mL乙腈溶液（5.3），振荡使其充分溶解，转移至50mL容量瓶中，用乙腈溶液（5.3）定容至刻度，得到标准溶液。6测定步骤6.1样品溶液的制备1DB21/T2752—2017将样品在105℃干燥4h。称取25.0mg样品于5

4、0mL烧杯中，加入25.0mL乙腈溶液（5.3），振荡使其充分溶解，转移至50mL容量瓶中，用乙腈溶液（5.3）定容至刻度，摇匀。用液相色谱仪测定前，样品溶液用滤膜（4.3）过滤。注：当样品是颗粒状态时，可将其在研钵中研细成粉末。6.2色谱条件应满足如下条件：a)流动相：乙腈溶液（5.3）；b)色谱柱：Amide-80色谱柱，粒径5µm，柱长250mm，内径4.6mm；c)流速：1.0mL/min；d)检测波长：195nm；e)进样体积：10µL。6.3色谱测定分别将标准溶液、样品溶液注入液相色谱仪（4.1）进行测定，记录谱峰面积。标准溶液的典型色谱图参见附录B。7结果的计算几丁寡糖的含量按下

5、列公式进行计算：式中：A——样品溶液中几丁寡糖的色谱峰面积；As——标准溶液中几丁寡糖标准品的色谱峰面积；m——样品的质量，单位为毫克（mg）；ms——标准溶液中几丁寡糖标准品的质量，单位为毫克（mg）；W——样品中几丁寡糖的百分含量，%；8重复性在同一实验室由同一操作人员完成的三个平行测定结果，相对标准偏差不大于5%；以三次平行测定结果的算术平均值为测定结果。2DB21/T2752—2017AA附录A（资料性附录）几丁寡糖的化学结构式3DB21/T2752—2017BB附录B（资料性附录）标准溶液的典型液相色谱图_________________________________4