葡寡糖含量的检测 液相色谱法（报批稿）

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1、ICS71.040.01A43DB21辽宁省地方标准DB21/T—2018葡寡糖含量的检测液相色谱法Determinationmethodforglucanoligosaccharides—Liquidchromatographymethod点击此处添加与国际标准一致性程度的标识XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施辽宁省市场监督管理局发布DB21/T—2018前言本标准是依据GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草的。本标准由大连市质量技术监

2、督局提出。本标准由中国科学院沈阳分院归口。本标准起草单位：中国科学院大连化学物理研究所。本标准主要起草人：陈玮、尹恒。5DB21/T—2018葡寡糖含量的检测--液相色谱法1　范围本标准规定了葡寡糖含量检测的术语和定义、原理、仪器设备、操作步骤、结果表示和重复性。本标准适用于以酵母细胞壁、真菌、褐藻、地衣、谷物以及其热凝胶等聚糖为原料，经加工制成的的葡寡糖产品中β-1,3-葡寡糖（聚合度2-6）含量的测定。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的

3、版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3　术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1　葡寡糖葡聚糖在酸水解或生物酶水解条件下降解为聚合度为2～6的线性低聚糖。3.2　葡寡糖含量葡寡糖产品中β-1,3-葡寡糖（聚合度2-6）的质量百分比。4　原理葡寡糖经过色谱柱分离后可得到多个单一聚合度的寡糖组分，分离后的葡寡糖组分进入检测器进行检测，在一定浓度范围内，检测信号的强度与葡寡糖浓度呈线性关系。通过外标法测

4、定并计算得到葡寡糖产品中不同聚合度葡寡糖组分的浓度和质量。不同聚合度葡寡糖的质量总和与其产品总质量比值的百分比结果，即为葡寡糖的含量。5　仪器和设备5.1　高效液相色谱仪：配有脉冲式安培检测器（PAD,pulsedamperometricdetector）。5.2　分析天平：感应量为0.0001 g。5.3　滤膜：聚四氟乙烯膜，0.2 μm。5DB21/T—20181　试剂和材料1.1　水：符合GB/T6682规定的一级水的规定，即电导率（25℃）/（mS/m）≤0.01；1.2　氢氧化钠溶液（

5、ω(NaOH)=50%）：色谱纯。1.3　三水乙酸钠：色谱纯。1.4　100mmol/L氢氧化钠溶液：量取5.23mL氢氧化钠溶液（6.2），用水定容至1000mL。1.5　800mmol/L三水乙酸钠/100mmol/L氢氧化钠溶液：称取108.86g三水乙酸钠，用水（6.1）溶解后加入5.23mL氢氧化钠溶液（6.2），再用水（6.1）定容至1000mL。1.6　葡寡糖标准品：昆布二糖，纯度≥95 %，昆布三糖，纯度≥95 %；昆布四糖，纯度≥95 %；昆布五糖，纯度≥90 %；昆布六糖，纯

6、度≥90 %；结构式参见附录A。2　测定步骤2.1　标样溶液的配置2.1.1　标样溶液A：分别称取10.00 mg经105 ℃干燥至恒重的5种葡寡糖标准品(6.6)于50mL烧杯中，加入20mL水（6.1），振荡使其充分溶解，转移至100 mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡寡糖浓度为100µg/mL。2.1.2　标样溶液B：吸取10.00mL标准溶液A转移至100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡寡糖浓度为10µg/mL。2.1.3　标样溶液C：吸取10.00mL标准溶液B转移至

7、100mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，葡寡糖浓度为1µg/mL。2.2　样品溶液的制备当样品是颗粒状态时，应先将其在研钵中研细成粉末。将粉末状样品在105 ℃干燥至恒重。称取25.0 mg样品于50 mL烧杯中，加入20mL水（6.1），振荡使其充分溶解，转移至100 mL容量瓶中，用水（6.1）定容至刻度，摇匀。用液相色谱仪测定前，样品溶液用0.2 μm滤膜过滤。2.3　检测条件需满足如下色谱条件：a)流动相A：100mmol/L氢氧化钠溶液（6.4）；b)流动相B：800mmol/L

8、三水乙酸钠/100mmol/L氢氧化钠溶液（6.5）；c)色谱柱：离子交换色谱柱，粒径5 µm，柱长250 mm，内径4.6 mm；d)柱温：30℃；e)流速：1.0 mL/min；f)进样体积：10µL。g)洗脱方式：梯度洗脱：0-1min：0%流动相B；1-30min：0%-37.5%流动相B；30-35min:37.5%-62.5%流动相B；35-40min:62.5%-0%流动相B。2.4　分析步骤5DB21/T—20181.1.1　标准曲线绘制在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，将标样