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《反相高效液相色谱法测定锁阳中熊果酸含量》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、·730·中国医院药学杂志2004年第24卷第12期ChinHospPharmJ,2004Dec,Vol24,No.12(proliferativevitreoretinopathy,PVR)。为了配合DEX2DDS2.5 方法精密度 依据前述方法制备0.025,0.5,2.5mg·-1的研究与开发,基于体内药物分析的原理和方法,本研究建L高、中、低3水平标准生物标本依法测定,于1d内连续测立了定量测定兔眼玻璃体腔DEX的方法,现报道如下。定5次,并连续测定3d,计算日内、日间RSD,结果见表2。1 仪器与试药表2 方法精密度Angilent1100高效液相色谱系统:脱气机
2、,四元泵,自动Tab2Intra2dayandinter2dayprecision进样器,VWD检测器,柱温箱。地塞米松磷酸钠对照品(青浓度日内精密度(n=5)日间精密度(n=15)-1-1RSD/%-1RSD/%岛市药品检验所,纯度99.8%);甲醇为色谱纯,磷酸二氢钾/mg·L…x±s/mg·L…x±s/mg·L为分析纯;水为纯化水,生物标本为实验研究过程获得。0.06250.0657±0.00294.40.0645±0.00335.10.50.512±0.0152.90.507±0.0285.52 方法与结果2.52.51±0.114.32.524±0.218.32.
3、1 生物标本前处理 兔眼玻璃体溶液0.1mL置于塑料离心管,并于鼓风干燥箱内70℃干燥2h,使蛋白脱水变性,2.6方法灵敏度 取空白玻璃体加入一定量的DEX标准品溶同时待测物得以浓缩,20μL流动相混旋溶解干燥物,5000r液制得低浓度标准标本,依法处理进样,测定峰高与噪声,以信-1·min-1离心5min,取10μL进样。噪比不小于3计算,DEX的最小检测浓度为0.020mg·L。2.2色谱条件[1]ZOBARXSB-C3 讨论18色谱柱(2.1mm(150mm,5.0μm);流动相:甲醇20.34%磷酸二氢钾(55∶45);3.1 标本的前处理 本法对生物标本的前处理中
4、,第一步柱温:25℃;检测波长:240nm;流速:0.2mL·min-1;进样量:热干燥可以有效和彻底地使蛋白等生物基质干燥变性,同时10μL。在此色谱条件下,DEX与玻璃体中的内源组分能得到地塞米松磷酸钠以其热稳定性而得以浓缩,加入流动相后溶[2]较好分离,DEX的保留时间为5.75min。见图1。解回收待测药物。本方法较文献方法成本消耗低,前处理操作简化,灵敏度显著提高。同时由于蛋白变性彻底,因此对色谱柱无任何的损害。有机溶剂去蛋白的前处理方法不但操作本身是稀释过程而降低检测灵敏度,更重要的是去蛋白有时不彻底从而堵塞色谱柱,这种堵塞会改变固定相对目标物的保留效果,进图1
5、 空白标本(a)、样品(b)HPLC色谱图而可能引起保留时间改变。这种保留时间的改变在DEX等Fig1Chromatogramsofblank(a)andsample(b)极性较大的药物的色谱行为中尤为明显,并且流动相有机溶2.3 玻璃体标准曲线的制备 精密称取DEX标准品剂比例较之沉淀介质越高,则沉淀不完全的蛋白再沉淀发生25.05mg于25mL量瓶中,加甲醇至刻度,配制含量为1g·越严重,堵塞的机率和程度会增加。-1L的标准储备液。精密吸取50μL标准储备溶液至10mL3.2 色谱条件的选择 对于DEX的色谱分析,中性流动相-1量瓶中,配制浓度为5mg·L的标准工作液。
6、精密吸取上或以醋酸为改性剂的酸性流动相都不能获得良好的峰形,或述标准工作液于塑料离心管,加入空白玻璃体溶液,分别制前沿或拖尾。以0.34%磷酸二氢钾为缓冲盐体系为流动相-1成浓度为0.0625,0.1,0.5,1.0,2.5mg·L标准生物标本。可以很好的改善峰形,但其改善程度对系统平衡时间有依赖按“2.1”生物标本前处理方法进行前处理,按“2.2”色谱条性,通常需要2h以上,而峰形的改善对低浓度体内药物分析件,依次进样10μL,以峰面积(Y)和浓度(X)进行回归,回而言显得尤为重要。进样溶媒的选择对峰形有显著的影响,归方程为:Y=265.8540X+4.7758,r=0.
7、9988。DEX在甲醇溶解进样可使峰形拖尾,流动相是最佳选择,这种关系-10.0625～2.5mg·L内线性关系良好。在DEX的色谱行为中具有依赖性。另外DEX的保留时间2.4方法回收率与绝对回收率 分别制备0.0625,0.5,2.5mg对洗脱强度的变化反应敏感,因此在进行该品种有关方法的-1·L标准生物标本按上述方法处理,测定DEX的含量,计算方开发时,应适当减小洗脱强度的变化,有机相比例的调整以法回收率。配制与理论进样浓度相同的DEX标准溶液,进样分0.5%的增减幅度为宜。析后峰面积外标法计算绝对回收率。结果
