马氏珠母贝collagen Ⅵ(COLⅥ)基因的克隆和功能研究.pdf

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6、VI蛋白。为了探究COLVI在马氏珠母贝贝壳形成中的作用，本实验运用聚合酶链式反应（PCR）和cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得COLVI基因的cDNA全长，利用荧光定量PCR技术检测基因的表达量分布，并采用原位杂交技术对COLVI进行精确定位。通过RNAi技术促使基因表达沉默，探究COLVI对贝壳结晶的影响。并利用原核表达技术获得了PmCOLVIA4-1的重组蛋白。1.本实验成功克隆得到COLVI基因PmCOLVIA4-1、PmCOLVIA6-1、PmCOLVIA6-2的cDNA全长。PmCOLVIA4-1序列全长3136bp，其中开放阅读框（ORF）长2841bp，编

7、码946个氨基酸，5'非翻译区（5'UTR）长93bp，3'非翻译区（3'UTR）长202bp。PmCOLVIA6-1序列全长2100bp，其中开放阅读框（ORF）长1875bp，编码624个氨基酸，5'非翻译区（5'UTR）长56bp，3'非翻译区（3'UTR）长169bp。PmCOLVIA6-2序列全长2192bp，其中开放阅读框（ORF）长1941bp，编码646个氨基酸，5'非翻译区（5'UTR）长41bp，3'非翻译区（3'UTR）长210bp。并验证了PmCOLVIA3、PmCO