DB34∕T 2817-2017 禽类产品中杆菌肽残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

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1、ICS67.120X18DB34安徽省地方标准DB34/T2817—2017禽类产品中杆菌肽残留量的测定液相色谱-串联质谱法Methodforthedeterminationofbacitracinresiduesinpoultryproduct-LC-MS/MSmethod文稿版次选择2017-03-30发布2017-04-30实施安徽省质量技术监督局发布DB34/T2817—2017前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由安徽省检验检疫科学技术研究院提出。本标准由安徽省动植物检验检疫标准化技术委员会归口。本标准起草单位：安徽省检验检疫科学技术研究院、合肥市动

2、物卫生监督所。本标准主要起草人：宋伟、韩芳、吕亚宁、胡艳云、杨磊、周典兵、丁磊、盛旋、郑平。IDB34/T2817—2017禽类产品中杆菌肽残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了禽类产品中杆菌肽残留量的液相色谱-串联质谱检测方法。本标准适用于鸡肉、鸭肉、鸡肝、鸭肝等禽类产品中杆菌肽残留量的测定和确证。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法原理样品中杆菌肽残留用0.1mol/LNa2EDTA

3、-Mcllvaine缓冲液（pH=4.0±0.05）提取，经离心过滤后，上清液用HLB固相萃取柱净化，液相色谱串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料4.1除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.2乙腈：色谱纯。4.3甲醇：色谱纯。4.4乙酸乙酯：色谱纯。4.5乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA·2H2O）。4.6柠檬酸（C5H8O7·2H2O）。4.7磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O）。4.8柠檬酸溶液：0.1mol/L。称取21.01g柠檬酸（4.5），用水溶解，定容至1000mL。4.9磷酸氢二钠溶液：0.2mol/L。称取28.41g磷酸氢

4、二钠（4.6），用水溶解，定容至1000mL。4.10Mcllvaine缓冲溶液：将1000mL0.1mol/L柠檬酸溶液（4.7）与625mL0.2mol/L磷酸氢二钠溶液（4.8）混合，必要时用氢氧化钠或盐酸调节pH=4.0±0.05。4.11Na2EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：0.1mol/L。称取60.5g乙二胺四乙酸二钠（4.4）放入1625mLMcllvaine缓冲溶液（4.9）中，使其溶解，摇匀。4.120.1％甲酸甲醇溶液：称取1mL甲酸于装有800mL甲醇的1L容量瓶中，用甲醇定容至1000mL。4.13OasisHLB固相萃取柱：500mg，6mL，或相当

5、者。使用前分别用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润。4.14杆菌肽标准物质：杆菌肽A（CAS：1505-87-4），纯度均大于等于92％，以下杆菌肽标准均以杆菌肽A计。1DB34/T2817—20174.15杆菌肽标准储备溶液：准确称取适量的杆菌肽A（4.13）于50mL容量瓶中，用0.1％甲酸甲醇溶液配制成0.1mg/mL标准储备溶液。储备在2℃～4℃保存，可用3个月。4.16杆菌肽标准工作液：根据需要吸取适量杆菌肽标准储备溶液（4.14），配制成适用浓度的标准工作液。该溶液在0～4℃冰箱中保存。4.170.22μm滤膜，有机系。4.18滤纸：快速。5仪器和设备5.1液相色

6、谱串联四级杆质谱仪或相当者，配电喷雾离子源。5.2分析天平：感量为0.01g。5.3组织捣碎机。5.4均质器：10000r/min。5.5高速冷冻离心机：转速不低于8000r/min。5.6pH计：测量精度±0.02。5.7固相萃取装置：带真空泵。5.8氮吹浓缩仪。5.9涡旋混合器。6试样制备与保存制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化。从所取全部样品中取出约500g，用组织捣碎机充分绞碎均匀，装入洁净容器中，密封，并标明标记，于-18℃冰箱冷冻存放。7测定步骤7.1提取称取均质样品5g（精确至0.01g），置于50mL具塞塑料离心管内，加入20mLNa2EDTA-Mc

7、llvaine缓冲液，以10000r/min高速均质1min后，4℃下以8000r/min的速度离心10min，将上清液经滤纸过滤倾入另一100mL具塞塑料离心管内待净化，再用20mLNa2EDTA-Mcllvaine缓冲液重复提取一次，滤纸过滤，合并上清液。7.2净化在预处理过的固相萃取柱顶部连接贮液器，移入上述试管中的全部样液，待样液全部通过固相萃取柱后，加入2mL水，弃去全部流出液。然后将固相萃取柱于负压下抽干30min，最后用3mL甲醇洗脱，收集全