流式细胞仪的原理和临床应用

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1、现代医学仪器与应用2008年第20卷第1期ModeicalEquipmentandApplicationFeb．2008．Vol20．No．1·49··综述·流式细胞仪的原理和临床应用沈二霞流式细胞术(flowcytometry，FCM)是利用流式细振荡，使液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就包含在胞仪对细胞等生物粒子的理、化及生物特性进行分析液滴之中。将这些液滴充上正或负电荷，当带电液滴的方法。它是上个世纪70年代初发展起来的一项高通过电场，便会在电场的作用下发生偏转，然后落人新技术。80年代初研制出了性能稳定良好的流式细胞相应的收集器中，从而实现细胞分选[21。仪，并开始被应用

2、到临床医学研究及疾病的诊断和监2临床应用测。流式细胞仪具有检测速度快、测量指标多、采集数据量大、分析全面、方法灵活等特点。近年来，随着流2．1在血液中的应用式细胞仪性能的不断改进和测定方法与技术的快速由于血液、骨髓标本采集比较方便，样品中各成发展，流式细胞术成为常规实验诊断的重要手段，一分呈分散悬浮状态，易于流式细胞仪的分析、分选等。些检验项目已成为临床疾病诊断、治疗方案选择、预因而血液学是流式细胞术技术首先和重要的应用领后判断等不可或缺的内容⋯。域。以下是流式细胞仪在血液学中的应用。2．1．1白血病的免疫分型白血病的免疫分型对1流式细胞仪的构成及工作原理白血病的诊断、制订治疗

3、策略、判断预后及发病机制流式细胞仪主要由液流系统、光学系统、电子系的研究都有重要的参考价值刚。FCM检测白血病免疫统、分析系统和细胞分选系统五个部分组成。将待测表型是利用荧光标记的单克隆抗体用分子探针多参细胞制成单细胞悬液。经荧光染料染色后加入样品数分析白血病细胞的细胞膜和细胞浆或细胞核的免管，在一定气体压力下待测样品被压人流动室。待测疫表型，可快速、精确分析白血病细胞，且重复性好。细胞在鞘液的包裹下单行排列，依次通过检测区，被其免疫分型的价值体现在：①能正确区别AML和荧光染料染色的细胞受到强烈的激光照射后，产生散ALL，并能进一步区别ALL中的T系、B系及亚型；②射光和荧光

4、信号。这两种信号同时被前向光电二极管能正确鉴别AML中的M0、M6、M7；③能诊断双系或和90o方向的光电倍增管(PMT)接收。散射光分为前双表型白血病；④能发现仅表达个别次要非本系列相向角散射(forwardscatter，FSC)和侧向角散射(side关抗原的白血病；⑤能诊断少见、疑难的白血病(如毛scatter，SSC)。前者主要反映被测细胞的大小，后者主细胞性白血病)；⑥微小残留病变的FCM检测对要反映被测细胞的胞质、胞膜、核膜的折射等，以及细AML、ALL病人具有重要的预后意义，它可指导l临床胞内颗粒的性状。光信号通过波长选择通透性滤片治疗．预测白血病复发，评价自体骨

5、髓移植的净化效，后，经光电倍增管接收后转为电信号，再经数／模转换果阁。器转换为可被计算机识别的数学信号。以一维直方图2．1．2阵发性睡眠性血红蛋白尿的诊断根据或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来fl,21。CD59表达将阵发性睡眠性血红蛋白尿(PNH)病人流式细胞仪还可以对分析中的目的细胞进行分分为三型，研究证明不同亚型对补体的敏感程度不选，它是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。流动同。特异地分析网织红细胞的CD59的表达。对于室的喷嘴上安装有超高频的压电晶体。可以产生高频PNH的诊断及病情评估有非常重要的意义。用流式细胞仪检测并计缺乏这类膜蛋白的异常血细胞．作者单位：中山大

6、学中山医学院免疫学教研室，广东，广州510080是目前诊断PNH最直接、最敏感、特异性最强且可·50-望垡垦兰堡矍量堕旦兰塑!至笙垫鲞笙!塑坚型!!!堂里旦!垫竺里!兰型垒￡21堡苎!!竺!!!垒：!塑墨：!!!垫：堕!：!以定量的良好手段，比传统的溶血试验具有更高的一种简单、快速、灵敏的流式细胞仪检测方法去定量特异性和灵敏度问。外周血中造血干细胞的数量。这一方法对于临床实验2．1．3在抗血小板抗体、抗中性粒细胞抗体、抗淋室中不同的流式细胞仪都有效，而且在不同的移植中巴细胞抗体分析方面的应用FCM测量血清和细胞心具有可比性。这一方案即为1996年问世的ISHAGE上相关抗体的方

7、法不断被用于抗血小板、抗白细胞、方案，迄今为止，其他各种改进方案均是以此方案为抗淋巴细胞抗体的分析。测量的原理类似于间接、直基础的。精确测定CD34对于判断移植后的植活和选接的Coombs试验。间接法是将病人血清与对照正常择G—CSF动员外周血造血干细胞的采集时间有着重人血小板一起孵育后：与标记荧光的抗人球蛋白混要的指导意义【111。匀、结合，再放入流式细胞仪进行荧光分析；直接法是2．1．6血小板功能的检测血小板膜糖蛋白(GP)将病人血小板与荧光标记的抗人球蛋白反应后进行是参与止血、血栓形成