苦马豆内生真菌分离鉴定与多样性分析-论文.pdf

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1、畜牧兽医学报2013，44(3)：465—474ActaVeterinariaetZootechnicaSinica苦马豆内生真菌分离鉴定与多样性分析周启武，赵宝玉，路浩，张潞，杨晓雯，张棵，温伟利(西北农林科技大学动物医学院，杨凌712100)摘要：为探明苦马豆中是否存在内生真菌及其分布情况，对采自内蒙古阿拉善盟草原的苦马豆样品进行内生真菌分离。通过内生真菌常规分离纯化法分离内生真菌，以确定75乙醇和2NaC10的最佳表面消毒时间，并运用形态学方法和rDNA—ITS系列技术对分离菌株进行种属鉴定。结果显示苦马豆叶和种子用75乙醇及2％Na—C1

2、0的最佳表面消毒时间分别为30S、3．5rain和50S、4min。最佳消毒条件下，叶的分离率最高(41．67)，种子次之(37．14)，种子中内生真菌种类与数量比最高(38．75)，其次是茎(20．O0％)。从苦马豆的4种组织中共分离得到8O株内生真菌，分属于4纲、5目、6科、1O属，其中链格孢属(Alternariasp．)和镰刀菌属(Fusariumsp．)的总相对分离率分别为53．75和21．25，为苦马豆内生真菌的优势菌属。苦马豆内生真菌的数量、种属组成与分布存在明显组织差异性；其中种子和叶是内生真菌侵染和定植的主要部位，且种子内生真菌

3、多样性最高。关键词：苦马豆；内生真菌；分离鉴定；rDNA—ITS；多样性中图分类号：$859．87文献标志码：A文章编号：0366—6964(2013)03—0465—10IsolationandIdentificationofEndophyticFungiinJsp口P，Dp口salsulaandItsDiversityAnalysisZHOUQi—WU，ZHAOBao-yu，LUHao，ZHANGLu，YANGXiao-wen，ZHANGLiang，WENWei—li(CollegeofVeterinaryMedicine，Northwest

4、A&FUniversity，Yangling712100，China)Abstract：EndophyticfungiwereisolatedfromSphaerophysasalsulasamplesfromAlashanofIn—nerMongoliatoinvestigatewhetherendophyticfungiexistinthisplantandtoassessthediversityanddistributionofendophyticfungi．Theoptimalmethodforsterilizationofplantma

5、terialssur—facewith75ethanoland2％NaC1Owasdeterminedbythegeneralmethodofendophyticfun—gus’isolationandpurification，speciesandgenusofendophyticfunguswasidentifiedbythetra—ditionalmorphologyandmolecularbiology．Itwasfoundthat75enthanolfor30S，2NaC1Ofor3．5min．and75enthanolfor50S，2N

6、aC1Ofor4rain．weremoresuitableforlearandseedsterilizationofSphaerophysasalsula，respectively．Undertheoptimalsurfacesterilizationconditions，leafhadamaximumisolationrates(41．67)，followedwithseed(37．14％)；andthespeciesandthequantityratio(38．75)ofendophyticfungiisolatedfromseedwasth

7、ehigh—est，followedwithstem(20．O0)．Eightystrainsofendophyticfungiwereisolatedfrom4dif—ferenttissuesofSphaerophysasalsula，whichbelongedto10genera，6families，5ordersand4classes．AlternariaspandFusariumspwerethedominantspeciesinthisplantwiththerelativefrequency53．75and21．25，respect

8、ively．Therewasanobviouslydifferenceinquantity，speciesanddistribution