大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法的建立-论文.pdf

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1、畜牧与兽医2013年第45卷第1期·19·大豆抗原蛋白血清抗体间接ELISA检测方法的建立孙志阔，王希春，石念进，汪洋，钟刚，徐同锏，刘芳芳，吴金节(安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥230036)摘要：旨在建立检测血清大豆抗原蛋白抗体的间接ELISA方法。经琼脂糖凝胶层析纯化大豆抗原蛋白，以不同剂量皮下注射免疫小鼠，采用方阵滴定法确定最佳抗原包被浓度及血清稀释度，并对其他条件进行优化，最终建立检测血清大豆抗原蛋白抗体的间接ELISA方法，利用该方法检测小鼠免疫后血清抗体水平。通过方阵滴定法确定11S蛋白最佳包被浓度为5．0g／mL

2、，血清稀释倍数为1：800；7S蛋白抗原最佳包被浓度为2．5g／mL，血清稀释倍数为1：1600；两者的批内、批间系数均小于10％，重复性较好，通过ELISA法确定11s和7s蛋白的最佳免疫次数为2次，免疫剂量为1000g／kg。结果表明本试验初步建立大豆抗原蛋白抗体检测间接ELISA方法，具有很强的特异性、敏感性和重复性，可用于大豆抗原蛋白过敏反应的临床检测。关键词：大豆抗原蛋白；纯化；ELISA；抗体中图分类号：$813．24文献标识码：A文章编号：0529—5130(2013)01—0019—06Developmentofan

3、indirectenzyme-linkedimmunosorbentassayfordetectingserumantibodiesofsoybeanantigenproteinSUNZhi—kuo，WANGXi—chun，SHINian-jin，WANGYang，ZHONGGang，XUTong-jian，LIUFang—fang，WUJin-jie(CollegeofAnimalScienceandTechnology，AnhuiAgriculturalUniversity，Hefei230036，China)Abstract：

4、Thestudyisaimedtodevelopanindirectenzyme—linkedimmunosorbentassay(ELISA)fordetectionofserumspecificantibod—iesofsoybeanantigenprotein．SoybeanantigenproteinswerepurifiedbyAgarosegelchromatographyandusedtoinjectKunmingmicewithdifferentdoses．AnindirectELISAwasdevelopedwit

5、hthepurifiedantigenproteinatdifferentconcentrations，andtheoptimalantigencon—centrationandserumdilutionweredeterminedbyphalanxtitration．Theotherworkingconditionswerealsooptimized．TheserumantibodylevelsofimmunedmiceweredetectedbytheestablishedELISA．Theoptimalcoatingconce

6、ntrationof11Sproteinandserumdilutionwere5．0g·mLand1：800，respectively．Theoptimalcoatingconcentrationof7Sproteinandserumdilutionwere2．5／xg·mLand1：1600，respectively．Bothintra—andinter—assayrepeatabilityofELISAwerelessthan10％．Theoptimalimmunetimesanddosesof11Sand7Sproteinw

7、ere2and1000g·kg～，respectively．ThedevelopedindirectELISAhadgoodspecificity，sensitivityandreproducibility．Thisstudyprovidesareliablemethodfortheclinicaldetectionofallergicreactionsinducedbysoybeanantigenprotein．Keywords：soybeanantigenprotein；purification；ELISA；antibody大豆

8、在我国普遍种植，具有价格便宜，蛋白质含长远的社会效益。因此，建立一种低廉、快速、简便量高等特点，是畜禽业生产中最主要的蛋白质来源。的针对大豆抗原蛋白过敏反应的诊断方法对畜牧业的然而，大豆中存在的抗原蛋白物质能引起人和动物尤发展具有十分