大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立-论文.pdf

《大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第35卷第4期河南工业大学学报(自然科学版)Vol_35．No．42014年8月JournalofHenanUniversityofTechnology(NaturalScienceEdition)Aug．2014文章编号：1673—2383(2014)04—0001—05网络出版网址：http：／／www．cnki．net／kcms／detail／41．1378．N．20140826．0928．001．html网络出版时间：2014—8—269：28：25大豆球蛋白间接竞争ELISA检测方法的建立布冠好，朱婷伟，陈复

2、生，张楠，刘昆仑，张丽芬(河南工业大学粮油食品学院，河南郑州450001)摘要：建立了大豆球蛋白间接竞争酶联免疫检测法(ELISA)，为食品中主要的大豆蛋白过敏原的检测提供技术基础．以纯品大豆球蛋白免疫新西兰大白兔，自制得到兔抗大豆球蛋白的多克隆抗体，并以大豆球蛋白包被抗原、自制抗体作为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG为酶标二抗，四甲基联苯胺(TMB)显色液为底物，建立了大豆过敏原中大豆球蛋白的间接竞争ELISA检测方法．确定了抗原的包被浓度为0．025p~g／mL，一抗最佳稀释度为1：3200，酶标二抗稀释度为

3、1：10000．检测结果达到板内误差3．82％，板间误差10．22％，在允许的误差范围之内；其检测的线性范围为0．O1～0．05p~g／mL．结果表明本试验所建的大豆球蛋白间接ELISA方法具有一定的重复性和灵敏度，可用于大豆蛋白制品过敏原的检测．关键词：大豆球蛋白；过敏原；多克隆抗体；间接竞争ELISA中图分类号：TS201．2文献标志码：A0引言过敏原在食物制品中的检测是非常困难的，因为变应原通常是很微量的，且可以由食物基质屏大豆和大豆副产品因为其较高的营养价值和蔽_1]．大豆球蛋白的定量测定可以通过高效液相色良好

4、的物理化学性质，被广泛应用于食品和饲料谱法进行，但该方法耗时，且需要昂贵的设备．免工业中．然而，大豆蛋白长期以来也被认为是食物疫分析方法因其操作简单、廉价、处理样品量大等过敏原之一．此外，由于大豆蛋白过敏原可能在幼优点已经被广泛应用．其中，酶免疫法(ELISA)现龄动物及人体内引起潜在的过敏反应，随着大豆已应用于牛乳蛋白、大豆蛋白的快速检测分析中_61．蛋白产品在食品工业中使用量的增加，大豆蛋白布冠好等I7J已建立了测定牛乳球蛋白的间接竞争致敏性的研究也越来越多⋯．在大豆中，至少检测ELISA方法．Liu等l8建立了竞

5、争ELISA方法来检到21种致敏蛋白，大豆球蛋白(Glycinin)是其中之测大豆中一伴大豆球蛋白的亚基，得到的方法一，它已被确定为主要的大豆变应原【2]．大豆球蛋灵敏度较高．Cucu等[9]基于竞争ELISA法来测定白是由酸性(A。a、Ab、A：、A，、A4、A)和碱性(Ba、食物中大豆过敏原蛋白．本研究意在建立一种间Bb、B、B、B)多肽链通过二硫键连接组成，其中接竞争ELISA法用于检测大豆中主要过敏原大豆每条酸性链和碱性链的分子质量分别为34～44ku球蛋白，为低敏性大豆制品的开发提供检测方法．和20kut，它

6、为11S的主要成分，占总大豆蛋白的19．5％～23．1％，分子质量为300～380kut1．据报道，1材料与方法大豆球蛋白过敏反应会产生腹泻、肠道损害、免疫1．1试验材料功能紊乱等现象l5l，而免疫反应的严重程度取决于大豆球蛋白(Glycinin，G3171)，口一conglycinin大豆球蛋白的剂量．(C5868)，酶标二抗(HRP标记的羊抗兔IgG，收稿日期：2014—03—14A6154)，弗氏完全佐剂和弗式不完全佐剂：Sigma基金项目：国家自然科学基金项目(31201293，21176058，3117179

7、0)；公司；新西兰大白兔：郑州大学实验动物中心提国家863项目(2013AA102208—5)；河南省教育厅科学技术研究重点供；兔抗Glycinin血清(自制)；牛血清蛋白(BSA)，项目(14B550013)TMB单组份显色液：北京索莱宝科技有限公司；其作者简介：布冠好(1980一)，女，河南洛阳人，副教授，博士，研究方向为食品蛋白质资源开发与利用．他试剂均为分析纯．通信作者2河南工业大学学报(自然科学版)第35卷1．2仪器与设备(pH9．6，50mmol／L碳酸盐缓冲液)稀释为0．1、96孔酶标板：ComingCo

8、star公司；FC型酶标0．05、0．025、0．0125~g／mL，每行一个稀释度加入仪：赛默飞世尔仪器有限公司；LRH一150F型恒温到酶标板中，4℃过夜．抗血清用封闭液稀释成生化培养箱：上海一恒科技有限公司．1：1600、1：3200、1：6400、1：12800、1：25600、1．3试验方法1：51200，每列一个稀释度