抗牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立.pdf

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1、第34卷第12期中国预防兽医学报Vo1．34．NO．122012年12月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineDec．2012doi：10．3969~．issn．1008—0589．2012．12．10抗牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立蒋颖，，林燕清，"，陶洁，孟祥升，段小丽，王娟，王银，张信军，王建业，朱国强(1．扬州大学兽医学院，江苏扬州225009；2．中国兽医药品监察所，北京100081；3．浙江诺倍威生物技术有限公司，浙江杭州310018)摘要：为建

2、立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)~；bL夹心ELISA检测方法，本研究将BVDV890病毒株(BVDV．21浓缩并纯化后免疫BALB／c小鼠，经常规技术进行细胞融合并筛选得到一株稳定分泌IgG的杂交瘤细胞株，命名为3F9。以BVDV单克隆抗体(MAb)IgM为捕获抗体，生物素标记的3F9为检测抗体，初步建立BVDV特异的双抗体夹心ELISA检测方法(BAS．ELISA)。采用建立的BAS．ELISA方法检测35份临床病牛血清样品，检出阳性样本13份；与RT．PCR的符合率达到94．29％；表明本研究所建立的BAS．ELISA方法可用于BVDV感

3、染的临床诊断，为BVDV的免疫学研究奠定了基础。关键词：牛病毒性腹泻病毒；E2蛋白；单克隆抗体；双抗体夹心ELISA中图分类号：$852．65文献标识码：A文章编号：1008．0589(2012)12．0972．04PreparationofmonoclonalantibodiesagainstbovineviraldiarrheavirusandthedoubleantibodysandwichELISAdevelpomentJIANGYingt，LINYan—qing1,3十，TAOJie，MENGXiang—sheng，DUANXiao

4、．1．．i，WANGJuan，WANGYin，ZHANGXin-jun，WANGJian—ye，ZHUGuo-qiang(1．CollegeofVeterinaryMedicine，YangzhouUniversity，Yangzhou225009，China；2．ChinaInstituteofVeterinaryDrugsControl，Beijing100081，China；3．Zh~iangEbvacBio—techCo．Ltd．，Hangzhou310018，China)Abstract：Toestablishadoublemono

5、clona1antibodyrMAb)一mediatedsandwichELISA(DAS．ELISA)fordetectionofbovineviraldiarrheavirus(BVDV)，theMAb3D8(IgM)andbiotin—labelled3F9(IgG)wereusedascaptureantibodyanddetectionantibodyrespectivelyafterobtainingahybridomacelllinestablysecretingantibody(3F9)．Thirty-fiveclinical

6、lysuspectedserasamplesweredetectedbythismethodandtheresultsof13sampleswerepositive．ComparedwithRT．PCRintheparalledexperimentwith11samplespositive，thecoincidenceratewas94．25％．ItissuggestedthattheDAS-ELISAwasapotentiallyvaluablemethodwithhighsensitivityandspecificityagainstBV

7、DV．KeyWOrds：bovineviraldiarrheavirus；E2protein；monoclonalantibody；sandwichELISA*Correspondingauthor；tEqualcontributors收稿日期：2012．06．09基金项目：江苏中美国际科技合作项目(BZ2005032)；江苏省农业支撑项目(BE2008363)；重大动物疫病防控技术弓进(国家农业部948计划，201003012)十共同第一作者：蒋~,(1982一)，女，江苏溧阳人，硕士研究生，主要从事病原微生物致病机理和免疫机理研究：林燕清

8、(1984‘)，女，福建福州人，硕士研究生，主要从事病原微生物致病机理和免疫机理研究．通信作者：E-mail：yzgqzhu@hotrnail．corn；yzgqz