最新实验五--PCR产物的回收幻灯片.ppt

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1、实验五--PCR产物的回收一、实验目的及背景在生物技术实验中，ＰＣＲ反应获得的目的片段，酶切后所得特定的ＤＮＡ序列，分子杂交中所制备的探针等，经过琼脂糖凝胶电泳后，目的片段与其它ＤＮＡ分开，这就需要有一套方法将目的ＤＮＡ从凝胶中分离出来，通过处理后得到纯化的目的ＤＮＡ，以用于以后分子杂交，重组子构建，序列分析等。从凝胶中分离回收ＤＮＡ的方法现在常用的技术有：电洗脱法低熔点琼脂糖凝胶法玻璃奶法快速纯化凝胶回收试剂盒三、实验步骤切取琼脂糖凝胶中的目的DNA条带，放入干净的离心管中称重，如凝胶重为100mg，可视为100μl（100mg≈100μl）

2、，以此类推。加入3倍体积溶液GSB，于55℃水浴融胶6-10min，间断（2-3min）混合，确保胶块完全融化，当胶完全融化后，观察溶液的颜色，如颜色为紫色，加入适量3M醋酸钠（pH5.2），调整颜色和GSB颜色相同（黄色）。（为增加DNA回收量，可加入1倍体积异丙醇于已融化的凝胶溶液中，如凝胶重为100mg，加入100μl异丙醇）。待融化的凝胶溶液降至室温（高温时吸附柱结合DNA能力弱），加入吸附柱中静置1分钟，10,000×g离心1分钟，弃流出液。4.加入650μl溶液WB，10,000×g离心1分钟，弃流出液。5.10,000×g离心1-

3、2分钟，去除残留的WB。6.将吸附柱置于一干净的离心管中，在柱的中央加入30-50μlEB或去离子水（pH＞7.0）（EB或去离子水在60-70℃水浴预热，使用效果更好），室温静置1分钟。7.10,000×g离心1分钟，洗脱DNA。将洗脱出的DNA于-20℃保存。结果与分析１．分析ＤＮＡ回收效果。２．记录电泳结果。2.2等差数列(1)高一数学必修五第二章数列作业讲评：课本：P34B组1学海：P233，P24探究活动复习巩固1.数列有哪几种表示方法？通项公式法、列表法、图象法、递推法.2.根据数列的项数多少和项的大小变化规律，数列可分为哪些类型？

4、有穷数列，无穷数列；递增数列，递减数列，摆动数列，常数列.知识探究（1）从0开始，将5的倍数按从小到大的顺序排列，组成的数列为：（2）在2000年悉尼奥运会上，女子举重被正式列为比赛项目，该项目共设置了7个级别，其中较轻的4个级别体重（单位：kg），组成数列48，53，58，63.0，5，10，15，20，25，…….观察下面的4个数列有什么共同特点？（3）水库管理人员为了保证优质鱼类有良好的生活环境，用定期放水清库的办法清理水库中的杂鱼.如果一个水库的水位为18m，自然放水每天水位降低2.5m，最低降至5m.那么从开始放水算起，到可以进行清理

5、工作的那天，水库每天的水位（单位m）组成的数列为：18，15.5，13，10.5，8，5.5.知识探究（4）我国现行储蓄制度规定银行支付存款利息的方式为单利，即不把利息加入本息计算下一期的利息.按照单利计算本利和的公式是：本利和＝本金×（1＋利率×存期）.按活期存入10000元钱，年利率是0.72%，那么按照单利，5年内各年末的本利和（单位：元）组成的数列为：10072，10144，10216，10288，10360.知识探究共同特点：从第2项起，每一项与其前一项的差都等于同一个常数.知识探究如果一个数列从第2项起，每一项与它的前一项的差等于同

6、一个常数，这个数列就叫做等差数列，这个常数就叫做等差数列的公差（常用字母d表示）.形成概念一般地，若a，A，b成等差数列，则A叫做a与b的等差中项.等差数列{an}的递推公式：等差数列{an}中，an－1，an，an＋1三者之间的关系：an－1＋an＋1＝2an（n≥2）形成概念设等差数列{an}的首项为a1，公差为d，请你写出a2，a3，a4，a5.a2＝a1＋da3＝a2＋d＝a1＋2da4＝a3＋d＝a1＋3da5＝a4＋d＝a1＋4d知识探究若等差数列{an}的首项为a1，公差为d，其通项公式为：设等差数列{an}的公差为d，当d＞0，

7、d＜0，d＝0时，数列{an}的特点：d＞0时，{an}是递增数列；d＜0时，{an}是递减数列；d=0时，{an}是常数列.形成概念例1写出下面四个等差数列的通项公式.（1）0，5，10，15，20，25，….（2）48，53，58，63.（3）18，15.5，13，10.5，8，5.5.（4）10072，10144，10216，10288，10360.（3）an=20.5－2.5n；（1）an=5n－5；（2）an=5n＋43；（4）an=72n＋10000.典例讲评例2求等差数列8，5，2，…的第20项.典例讲评例3判断－401是不是等差

8、数列－5，－9，－13，…的项？如果是，是第几项？例4在等差数列{an}中，已知a5=10，a12=31，求a1，d和an.典例讲评例5某市出租车的计