奶牛胎衣不下病因调查及阴离子盐防治效果的研究

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摘要胎衣不下（RFM）是奶牛重要的繁殖障碍性疾病之一，造成奶牛产业严重的经济损失。本研究在甘肃某牛场四分场和五分场展开，通过对RFM发病率流行病学调查、阴离子日粮对奶牛胎衣不下的防治效果和阴离子盐对围产期奶牛尿液pH、部分血清指标和生产性能的影响三个主要方面进行研究。试验在甘肃某牛场四分厂和五分场进行。四分厂共存栏1100头奶牛，对614头奶牛在2013年10月至2014年9月的分娩情况进行流行病学调查。分析不同因素对RFM发病率的影响。两个牛场分别给妊娠母畜饲喂含有阴离子盐的日粮和正常日粮。通过对饲料中主要阴阳离子的检测，计算出DCAD值，并探究阴离子盐对RFM发病率的影响。观察饲喂阴离子盐后奶牛尿液pH的变化。选取四分场、五分场各10头奶牛在分娩前7天、5天、3天和分娩后1天颈静脉采血，分离血清。对试验奶牛血清中矿物质元素K、Na、Cl、Ca、P、Mg，GOT（谷草转氨酶）、GPT（谷丙转氨酶），PTH（甲状旁腺激素）、1,25-(OH)2D3（1,25-二羟基维生素D3）进行检测；统计分析添加阴离子盐后对围产期奶牛乳热发病率、泌乳量的影响。发病规律调查结果发现，季节对RFM发病率影响显著，四季发病率从高到低，依次为：夏、冬、秋、春。随着胎次的增加，RFM发病率呈显著递增趋势。早产、流产、难产、子宫感染会提高RFM发病率。胎儿过轻或过重的发病率均高于正常体重范围内的RFM发病率。胎儿性别不是RFM的主要影响因素。双胎极显著的增加了RFM的发病率。奶牛四分场饲料DCAD为−68.32meq/kgDM，为阴离子型饲料。五分场饲料DCAD为33.02meq/kgDM，为阳离子型饲料。四分场在日粮中添加阴离子盐，显著降低了RFM的发病率。饲喂含有阴离子盐饲料的母畜尿液pH值下降至6.81左右，呈弱酸性。血清检测结果证实，试验组血清中Ca含量显著高于对照组，其他差异不显著。血清中GOT、GPT含量变化差异不显著。同时说明了阴离子盐对于肝脏功能没有损伤。试验组与对照组相比，血清中PTH含量显著降低、1,25-(OH)2D3含量显著升高。饲喂阴离子盐，可有效减少乳热的发生，显著提高围产期奶牛产后泌乳量。关键词：奶牛胎衣不下发病率阴离子盐生产性能I AbstractRetainedfetalmembranes（RFM）isanimportantreproductivefailuredisease,whichcausesagreateconomiclossindairycattleindustry.ThestudywasstartedinthefouthandthefifthdairyfarmofGansuprovince.ThestudycontainstheinfluencefactorofmorbidityofRFM,rationwithanionicsaltseffectfactorofefficiencyofcontrolRFMdailyrationwithanionicsaltsandefficiencyofanionicsaltsandrationwithanionicsaltseffectfactorofefficiencyoftheproduction.ThesimpleswerefromthefouthandthefifthdairyfarmofGansuprovince.Therewere1100dairiesintheFouthfarm,epidemiologicalinvestigationofdeliveryconditionswasconductedto614ofthe1100dairycowsdeliveryconditionsfromOctober2013toSeptember2014anddifferentinfulencefactorsinRFMwereanalyzed.Thepregnantdairycowsfromthefouthandthefifthdairyfarmwerefedrationwithanionicsaltsandnomalrationrespectively.ValueofDCADwasworkedoutbythedetectionforzwitterions.ThenwestudiedhowtheanionicsaltseffecttoRFManddetectthevariationsinurinePHofthedairycow.Thebloodsampleswerecollectionedfromexternaljugularveinof10dairycowsfromboththefouthandthefifthdairyfarmandseparateserumatantepartum(7days,5days,and3days)and1dayafterdelivery.TheconcentrationofK、Na、Cl、Ca、P、Mg,GOT、GPT,PTH、1,25-(OH)2D3wasdetected.Theeffectsofanionicsaltstolactationyieldandincidenceofmilkfeverwereanalyzed.TheresultsshowthattheincidenceofRFMvariessignificantlyinseasonswithauppertolowerrangesummer,winter,autumnandspring.Asthenumberofparitywasincreased,themorbidityofRFMwasincreased.ThemorbidityofRFMwouldbeenhancedbecauseofprematurebirth,abortion,childbirth,uterineinfection.Theweightoffetuswasunderweightoroverweightbothcausedtheenhancedmorbidity.Sexoffetuswasnotthemaininfluencefactors.Twinsincreasedthemorbidityobviously.Fodderinthefouthdairyfarmwasanionicfodder(DCAD=-68.32meq/kgDM).Fodderinthefifthdairyfarmwascationicfodder(DCAD=33.02meq/kgDM).Theadditionofanionicsalts,bringdownthemorbidityofRFM.Theurine-phvalueofthedairycowshaddowntoabout6.81afterfeedanionicfodder.Theresultofseradiagnosis,theconcentrationofCawashigherthanthecontrolgroupsignificantly.II ThevarietyofconcentrationofGOT、GPTwasnon-significantwhichshowstheanionicfodderhadondamageinliverfunction.TheconcentrationofPTHwasdecreasingsignificantly,theconcentrationof1,25-(OH)2D3wasincreasingsignificantly.Themorbidityofmilkfeverwasdecreasedandthepostnatalmammaryvolumewasincreasedafterfeedinganionicfodder.Keywords:RFM;morbidity;anionicsalts;productionperformanceIII 目录第一章文献综述...........................................................................................................................11.1奶牛胎衣不下概述..............................................................................................................11.2奶牛胎衣不下原因..............................................................................................................11.2.1饲养不当.......................................................................................................................11.2.2应激...............................................................................................................................21.2.3异常分娩.......................................................................................................................31.2.4年龄胎次.......................................................................................................................31.2.5疾病...............................................................................................................................31.3奶牛胎衣不下的发病机制..................................................................................................41.3.1母畜体况.......................................................................................................................41.3.2营养代谢紊乱...............................................................................................................41.4奶牛胎衣不下的治疗..........................................................................................................41.4.1手术剥离.......................................................................................................................41.4.2子宫局部治疗...............................................................................................................41.4.3全身治疗.......................................................................................................................51.4.4中药治疗.......................................................................................................................51.4.5阴离子盐治疗...............................................................................................................61.5奶牛胎衣不下的危害..........................................................................................................61.5.1繁殖性能降低................................................................................................................61.5.2泌乳能力下降...............................................................................................................61.6饲料中矿物质常量元素作用..............................................................................................71.6.1钙...................................................................................................................................71.6.2镁...................................................................................................................................71.6.3磷...................................................................................................................................81.6.4钠...................................................................................................................................81.6.5氯...................................................................................................................................81.6.6钾...................................................................................................................................81.6.7硫...................................................................................................................................9IV 1.7日粮阴阳离子平衡..............................................................................................................91.8目的和意义..........................................................................................................................9第二章奶牛胎衣不下发病情况及影响因素调查.....................................................................112.1材料与方法........................................................................................................................112.1.1实验动物......................................................................................................................112.1.2实验方法......................................................................................................................112.1.3统计分析......................................................................................................................122.2结果与分析........................................................................................................................122.2.1奶牛胎衣不下与分娩季节的关系..............................................................................122.2.2奶牛胎衣不下与胎次的关系......................................................................................132.2.3奶牛胎衣不下与妊娠时间的关系..............................................................................142.2.4奶牛胎衣不下与流产、难产的关系..........................................................................152.2.5奶牛胎衣不下与子宫是否感染的关系......................................................................152.2.6奶牛胎衣不下与胎儿体重的关系..............................................................................162.2.7奶牛胎衣不下与胎儿性别的关系..............................................................................172.2.8奶牛胎衣不下与单双胎的关系..................................................................................182.3讨论....................................................................................................................................182.3.1奶牛胎衣不下与分娩季节的关系..............................................................................192.3.2奶牛胎衣不下与胎次的关系......................................................................................192.3.3奶牛胎衣不下与妊娠时间的关系..............................................................................202.3.4奶牛胎衣不下与流产、难产的关系..........................................................................202.3.5奶牛胎衣不下与子宫是否感染的关系......................................................................202.3.6奶牛胎衣不下与胎儿体重的关系..............................................................................202.3.7奶牛胎衣不下与胎儿性别的关系..............................................................................202.3.8奶牛胎衣不下与单双胎的关系..................................................................................212.4小结....................................................................................................................................21第三章阴离子日粮对胎衣不下的影响.....................................................................................233.1材料与方法........................................................................................................................233.1.1试验材料......................................................................................................................233.1.2试验动物......................................................................................................................23V 3.1.3主要仪器.....................................................................................................................243.1.4试验方法.....................................................................................................................243.1.5统计分析.....................................................................................................................243.2结果与分析......................................................................................................................243.2.1DCAD的计算..............................................................................................................243.2.2胎衣不下发病率对比.................................................................................................253.3讨论....................................................................................................................................263.3.1饲料中离子对DCAD的影响....................................................................................263.3.2DCAD对奶牛胎衣不下的影响..................................................................................263.4小结....................................................................................................................................27第四章阴离子盐对围产期奶牛尿液pH、部分血清指标和生产性能的影响.......................294.1材料与方法........................................................................................................................294.1.1试验材料.....................................................................................................................294.1.2试验动物.....................................................................................................................294.1.3试验方法.....................................................................................................................294.1.4统计分析.....................................................................................................................304.2结果与分析........................................................................................................................304.2.1尿液pH值测定...........................................................................................................304.2.2阴离子盐对矿物质K、Na、Cl、Ca、P、Mg的影响............................................314.2.3阴离子盐对GOT、GPT的影响................................................................................334.2.4阴离子盐对PTH、1,25-(OH)2D3的影响................................................................354.2.5阴离子盐对乳热和泌乳量的影响.............................................................................364.3讨论....................................................................................................................................394.3.1阴离子盐对奶牛尿液pH的影响...............................................................................394.3.2阴离子盐对矿物质K、Na、Cl、Ca、P、Mg的影响............................................394.3.3阴离子盐对GOT、GPT的影响................................................................................404.3.4阴离子盐对PTH、1,25-(OH)2D3的影响................................................................404.3.5阴离子盐对乳热和泌乳量的影响.............................................................................404.4小结....................................................................................................................................41结论...............................................................................................................................................43VI 参考文献.................................................................................................................................45致谢.............................................................................................................................................51个人简历.......................................................................................................................................53VII 符号说明符号英文全称中文全称REMRetainedfetalmembranes胎衣不下CaCalcium钙PPhosphonium磷MgMagnesium镁NaNatrium钠ClChlorinum氯KKalium钾SSulphur硫PTHHyperparathyroidism甲状旁腺激素1,25-(OH)2D31,25-dihydroxyvitaminD31,25-二羟基维生素D3DCADDietarycation-aniondifference日粮阴阳离子差GOTGlutamic-oxalacetictransaminase谷草转氨酶GPTGlutamic-pyruvictransaminase谷丙转氨酶VIII 第一章文献综述近十几年来，我国奶牛事业发展快速。奶牛存栏、牛奶产量大幅增加。奶制品人均消费也随之增高。数据显示，牛奶消耗量以每年平均13.60%的速度增长。随着生活质量和人们意识的不断提升，奶制品需求量也在不断增加。奶牛事业健康稳定的发展则尤为必要。为了适应市场需求，集约化养牛程度越来越高。奶牛存栏数量和泌乳量增加的同时，疾病也随之增多。1.1奶牛胎衣不下概述奶牛胎衣不下是常见的产后疾病之一。普遍认为，奶牛产后12h内未将胎衣完全排[1]出，则称为胎衣不下(retainedfetalmembranes,RFM)。奶牛胎盘类型为子叶型胎盘。母体胎盘与子宫肉阜分离困难。分娩频繁，高度代谢造成机体负担。多种因素叠加易引起RFM。[2][3-7]RFM发病率正常范围为6-11%。部分数据显示，国外的RFM发病率在4-13%。[8][9-11]我国的RFM发病率则在10-31%。有些地区更甚，达到45%以上。RFM治疗不及[12,13]时还可诱发诸多产科疾病。子宫内膜炎、子宫积脓、真胃变位均有被诱发可能。同时[14,15]还会影响奶牛生产繁殖性能。子宫复旧延时、妊娠率下降、泌乳量减少等。RFM发[16,17]病原因多样复杂，气候、营养、疾病、母体自身状况、胎儿情况等都有影响。RFM的高发病率，给奶牛产业带来了严重的经济损失。直接影响生产水平和奶制品的生产加工。1.2奶牛胎衣不下原因1.2.1饲养不当1.2.1.1饲料霉变储藏饲料的环境空气不流通，加之饲料含水分较高，保管不当等情况，都会引起饲料霉变。奶牛尤其是妊娠奶牛采食后，会增加RFM发病率。曾有报道，妊娠奶牛食用发霉[18]的青贮后，RFM发病率达24.6%。因此，在饲料中按比例适量添加霉菌吸附剂，可以对此状况有所改善。1.2.1.2营养不合理普遍认为RFM与营养有一定关系。矿物质、维生素、微量元素均与RFM紧紧相关。血钙含量低会导致子宫肌肉收缩无力，已引起胎衣不下或者乳热。硒和VE缺乏也会引起1 [19]RFM，已有实验证实。因其能够维持细胞完整性。钾、钠、镁含量过高或过低也会引起[20]高RFM发病率。干奶期间营养不足或者过盛，同样会增加RFM发病率。产后子宫收缩无力，如下图所示，由于产前低血钙导致肌肉运动机能下降，从而导致产犊时子宫平滑肌收缩无力，致使产后出现胎衣不下。同时，我们还可以看出，出现低血钙后，骨骼肌、瘤胃平滑肌、乳头也会相应的出现一些问题，因此，当出现胎衣不下时，也要关注其他疾病的发病情况。1.2.1.3运动不足[21]妊娠奶牛运动量和时间对RFM有重要影响。国外研究显示，分娩前一个月开始，[22]定时驱赶妊娠奶牛，有利于顺产，加快胎衣排出和子宫复旧，国内也有与之相应的报道。[23]相同饲养条件下，舍饲RFM发病率极显著高于开放式饲养。国内也已有试验证实，相[24]同条件下，有运动场的RFM发病率远低于没有的。对没有运动的妊娠奶牛进行血液流变学分析。结果得出，血液循环不通畅，子宫组织缺乏能量和氧气。1.2.2应激应激与分娩奶牛胎衣排出时间关系紧密。分娩过程中会受到很多应激干扰。季节的变化对于RFM的发生时一个很重要的应激因素。季节的更替，温差变化，产生冷热应激。有调查显示，RFM发病率夏、秋高于春、冬。表明，高温高湿会增加RFM发病率。研[25]究发现，即使是一个细微的干扰都将会导致分娩时胎衣排出拖延3个小时左右。混乱的环境同样会对RFM造成影响。试验指出，与之相比，安静的氛围下RFM发病率明显降[26]低。正常胎衣排出时，子宫收缩。大量血液从胎儿和母体胎盘释放出来。绒毛和粘膜腺2 窝之间的作用力减小，从而分离。然而，当有应激发生时，会抑制子宫的收缩。热应激时，代谢紊乱，血管扩张。通往胎盘的血液增多，绒毛肿胀，使母子胎盘分离困难。人为因素方面的助产，不易过早介入。完整的分娩过程是由神经、内分泌、免疫等多种调控相互协调完成。其中任何一个环节受到刺激，都不能充分发挥调控作用。最终引起子宫肌肉收缩无力，引起RFM。1.2.3异常分娩对于母畜而言的流产、难产、助产等。对于胎儿来说的死胎、早产、双胎等。都会增加RFM的发病几率。流产和死胎发生时，胎盘上皮不能及时变性。雌激素不足，孕酮过高。有试验表明，对胎盘上皮细胞进行检测，RFM组显著高于正常组，且与妊娠9个月[27]的值接近。因为其变性坏死是胎衣排出的必要条件。所以流产和死胎都会增加RFM发病几率。早产同样会使RFM发病率增加。难产会使RFM易发，尤其是初产奶牛。分娩时间被延长，肌肉疲劳。母子胎盘之间充血、水肿更加大了胎衣排出的难度。而当母畜怀有双胎时，极易引起RFM的发生。双胎分娩过程显著延长，母畜子宫过度扩张。长时间的分娩使分娩奶牛体力下降，疲惫，后期收缩力降低。1.2.4年龄胎次随着时间的推移，母畜频繁妊娠，RFM发病率也随之增高。当奶牛步入老龄化，即10岁左右，可以考虑淘汰。也就是大约7胎上下，未淘汰的要加强营养和运动。分娩次数增多，必然会对产道有所损伤。子宫和阴道也会不可避免的被感染，导致子宫内膜炎的发生。年龄的增长、分娩次数的增多、日常泌乳，都会降低妊娠奶牛体质。子宫平滑肌收缩力随之降低，导致RFM发病率升高。1.2.5疾病胎盘发生病理变化时，胎儿胎盘绒毛无法从腺窝中脱离。常见的胎盘病理变化包括水肿、充血、炎症、坏死等。这些都会使绒毛和腺窝之间的血液无法排出。扩张压力始终存[28]在，二者无法分离。子宫内膜炎、酮病、乳热症、布氏杆菌以及病毒、霉菌等感染都能引起子宫内膜及胎盘发炎,继而引起结缔组织增生,使胎儿胎盘和母体发生粘连,导致胎衣不[29]下。3 1.3奶牛胎衣不下的发病机制1.3.1母畜体况子宫平滑肌有力收缩是胎衣顺利排出的保障。如果妊娠奶牛本身就体况较差、虚弱，则RFM发生几率就会很大。或因难产等其他因素而使体力消耗透支，致使子宫肌肉收缩无力，胎衣无法排出。有学者通过试验检测产后子宫阵缩情况，发现胎衣排出后阵缩显著[30][31]下降，甚至停止，同样试验结果也被证实。由此可以看出，母畜子宫收缩时RFM发生的原因之一。1.3.2营养代谢紊乱营养代谢与RFM有着紧密关联。营养不平衡是RFM的根本原因。RFM发病奶牛[32]分娩前后12h血清中Ca和Mg显著低于正常组。很多相关报道也显示，分娩后血清中[33,34]Ca、P、Mg与正常组相比显著降低。血钙含量低，子宫平滑肌收缩力减弱。神经、肌肉敏感性下降，引发RFM。干奶期饲料精料比例过多、分娩母牛超重均易导致RFM。硒和VE水平也显著影响着RFM的发生。二者是维持免疫系统和体细胞完整的关键。RFM[35]发生时，与正常组相比，硒差异不显著，VE差异显著。但是在产前饲料中的人为补充，[36]可使RFM发病率降低。另外，产前饲喂精料过多，或者饲喂多度是引起RFM发生的原因。1.4奶牛胎衣不下的治疗RFM病因的复杂性和不确定性，给防治带来了难度。尽管国内外研究人员一直在积极探究，但目前还没有可以完全治疗的方法。1.4.1手术剥离手术剥离曾因简单快速，而被广泛应用。强制使母子胎盘分离。防止残留胎衣污染子[37][38]宫内环境。加快子宫净化和产后恢复。但手术剥离容易对子宫造成损伤或者感染。若[39]未剥离彻底，腐烂的残留会继发子宫内膜炎。并导致其他产后疾病的发生。临床治疗时，轻拉不能去除胎衣残留部分时，应放弃治疗。避免对子宫造成更大的伤害。1.4.2子宫局部治疗RFM可以继发其他奶牛疾病，比如子宫内膜炎。子宫内给药，治疗的同时还可以预4 防炎症发生。治疗药物主要为抗菌素和防腐抑菌药。子宫内灌注抗菌药是常用的治疗手法。虽然这种方法可以控制子宫内细菌，但同时也破坏了上皮细胞的变性坏死。会对胎衣的正常排出造成影响。常用的治疗药物之一是四环素类药物。其会抑制分解胎盘之间胶原结构的金属蛋白酶的活性，对胎衣正常排出造成干[40,41][42-44]扰。只能浅层的改善症状，不能提高繁殖性能。只考虑到了预防产后其他疾病的发生，却对RFM有所影响。从繁殖性能和长远效益角度出发，这种治疗不是最合适的。防腐抑菌剂同样常用于临床治疗。也是用来预防炎症发生、提高繁殖性能。臭氧因[45][46]具有抗菌、抗炎等作用，广泛应用。在人医上，臭氧物理治疗尿道炎和子宫炎。兽医[47]上，奶牛生殖道炎也有很好的治疗效果。子宫灌注臭氧，可有效减少流产、缩短空怀期。[48]还可以增加产后再次受孕率，治疗RFM效果理想。与抗菌药相比，这种方法避免了耐药性的产生。但是，从根源上考虑，该方法也是主要防腐抗菌，预防炎症发生，并非针对RFM的治疗。1.4.3全身治疗有些RFM病牛伴有体温升高的情况。此时，需要全身使用抗菌素并输液。试验结果[49]显示，头孢噻呋全身治疗和局部治疗伴有发热的RFM病例，疗效差异不显著。全身治疗相对于局部治疗，降低了抗菌素的不必要重复使用。同时，体温的变化也可作为了解奶牛分娩后恢复的指标之一。前列腺素和缩宫素常用于临床治疗。这两者主要是促进子宫收缩。有报道显示，分娩[50]后3h应用缩宫素可降低RFM发病，并提高产后繁殖性能。但同时还有报道称，两种[51,52]药物的使用不可以减少RFM的发生。虽然对于治疗上有所歧义，但确实促进子宫收[53]缩、加快排空，有利于复旧。相对于RFM，对于子宫迟缓的治疗效果更好，更常应用。尽管如此，恰当使用还是对RFM治疗有一定效果的。1.4.4中药治疗中兽医人员在大量的临床实践中进行总结经验，形成独特的中医治疗方法。杨国林研[54]究指出，RFM的主治原则是“活血化瘀，行气利水”。使用生化汤具有温经散寒、活血[55][56]化瘀的作用。吕新胜证实，中医治疗RFM的同时还能提高繁殖性能。还有很多资料[57-59]显示，中药治疗对RFM确实有治疗效果。但治疗见效时间相对较慢。5 1.4.5阴离子盐治疗体液酸碱度对RFM有着重要影响。碱性环境下会破坏PTH的活性，使1,25-(OH)2D3合成受阻。从而使钙的重吸收受阻，最终降低奶牛对钙的有效调控。采食添加阴离子盐的口粮后，奶牛体液变为酸性环境。尿液中的钙量增加，血钙降低。启动体内钙的调节机制，促进PTH和1,25-(OH)2D3的合成释放，达到动用骨钙、稳定血钙的目的。阴离子盐主要是通过刺激骨钙动用、肾脏对钙的调节、影响小肠钙的吸收等途径防止低血钙发生。在分娩前后给奶牛饲喂含有阴离子盐的口粮，可以提高血钙的浓度。饲喂负DCAD口粮能够增加轻基脯氨酸浓度，刺激骨骼钙的动用。阴离子盐可提高肠道酸度，增强肠钙的吸收。怀孕后期和产奶开始时，降低DCAD可促使PTH所诱导的1,25-(OH)2D3。合成数量增加，提高血浆钙的浓度。在口粮DCAD负平衡的情况下，奶牛分娩时血浆中钙离子浓度明显提高。因此，阴离子盐防治低血钙的作用机理主要有两种途径。一是阴离子盐使尿液中钙的排泄量增加，从而反馈性的引起PTH和1,25-(OH)2D3合成数量的增加，刺激骨钙的动用，预防低血钙。另一种是导致消化道内pH下降，激活钙转运细胞受体的功能，促进肠钙的被动吸收。改善了钙的吸收，在分娩时增强子宫肌肉收缩力，降低RFM发病率。1.5奶牛胎衣不下的危害RFM的发生，严重影响着奶牛的繁殖性能和泌乳能力。还可引发其他产科疾病，如子宫内膜炎、子宫蓄脓等。推迟子宫复旧、奶牛发情，降低繁育性能。若引发乳房炎，影响泌乳能力，经济损失严重。1.5.1繁殖性能降低[60]RFM很大程度上会诱发子宫内膜炎，降低繁殖能力，诱发率高达85%以上。原因在于子宫复旧迟缓、推迟发情，淘汰率升高，降低繁殖性能。RFM影响受孕指标包括5[61]种。即受胎率、空怀时间、输精指数、卵巢囊肿和流产发病率。有报道称，RFM还会[62]延长妊娠时间。1.5.2泌乳能力下降RFM发病本身就会引起奶牛泌乳能力的下降，而且还会继发乳房炎。有学者发现，[63]8%-13%的乳房炎与之前的RFM有关，并且相关性显著。6 1.6饲料中矿物质常量元素作用许多无机元素对于动物的正常生长和繁殖是必不可缺的。就奶牛而言，对于泌乳、妊娠、生长更是所必需的。以下主要就矿物质常量元素中的Ca、P、Mg、Na、K、Cl进行介绍。这些常量元素是维持酸碱平衡、神经冲动、酶活性中起着关键作用。1.6.1钙细胞外液中的钙是骨骼形成、肌肉兴奋过程中所必需的。细胞内液中的钙含量远小于细胞外液中。但与生物酶活化过程关系密切。动物体内98%的钙以磷酸盐形式存在于骨骼中。其余2%主要存在于细胞外液中。钙离子含量受血浆pH影响。pH降低时，含量接近50%。升高时则接近45%。泌乳奶牛中相当一部分钙是通过乳汁流失的。饲料钙的摄入、骨钙的溶解和肾小球对钙的重吸收作用，可以弥补钙的流失。甲状旁腺对颈动脉的血钙浓度非常敏感。浓度下降时，PTH会分泌出来。增强肾脏对钙的重吸收，降低尿钙损失。同时还刺激肠钙和骨钙的吸收。大量实验显示，低血钙的奶牛体内PTH含量高于正常奶牛。饲料中的钙最终只有进入细胞外液中才能满足生产需求。当消化液中钙离子浓度达到一定浓度时，可在消化[64]道任何部位被吸收。成年反刍动物对钙的吸收以主动转运为主，并且受1,25-(OH)2D3调控。当饲料钙的水平不足时，骨钙会被动员出来，维持钙的稳定。由于血钙要用于形成初乳中的钙并分泌，血钙在分娩前几天会有所下降。血钙浓度受PTH和1,25-(OH)2D3的协同调控。这些激素在围产期作用于肠、肾脏和骨组织以增加血钙。然而肠、肾脏和骨组织几天之后才能适应教改的钙需要。因此，一般产后几天之后血钙会恢复到正常水平。有研[65]究显示，低血钙造成子宫肌肉的弹性消失，增加RFM发病率。在产前饲料中添加硫酸[66]铵或氯化铵降低阴阳离子差，缓解低血钙情况，降低RFM发病率。1.6.2镁镁是细胞内的主要阳离子。作为酶促反应的辅酶因子参与体内主要代谢途径。细胞外的镁对于动物机体正常的神经传导、肌肉收缩和骨骼矿物质元素沉积至关重要。由于骨骼重吸收的是钙离子而不是镁离子稳恒调节的作用结果。所以，当酶缺乏时，骨骼中沉积的镁并不能作为镁源被及时利用。维持血浆镁的正常浓度几乎完全依赖于动物对饲料中镁的吸收。7 1.6.3磷磷的生物学功能相对广泛。80%存在于骨骼内。与机体血液和其他体液的酸碱缓冲体系以及细胞分化紧密相关。分娩前后通过内分泌系统而调节体内磷稳定。在一项关于母羊妊娠与饲料磷的试验中得出，提高饲料磷和钙的含量不会增加磷的存留量和利用率。骨骼中磷发生重吸收，只是动物分娩前后对钙的需要量增加的结果。分娩前后钙的内环境稳定性有较高的生理优先权。骨骼中贮存的矿物质元素在妊娠末期和泌乳在早期被动员出来，[67]与磷的吸收率无关。研究发现，产前饲料磷水平对RFM的发生没有影响。1.6.4钠牛具有很强的通过肾保留钠和从小肠后段和大肠对钠进行有效吸收的能力。奶牛能够有效利用饲料中的钠，但只有很少的钠以便于参与代谢的形式被贮存起来的。饲料中钠过量时，机体排泄的钠量也相应增加。整个消化道都能对钠进行被动吸收。实际上，与浓度[68]梯度相对抗的主动吸收在小肠后段和大肠也进行。血液和其他组织的钠浓度主要通过肾脏重吸收和排泄机制来维持。钠是排泄离子的关键。激素可通过组织上的受体、血管紧张肽原酶-血管紧张素系统、醛固酮和心房的保尿钠排泄因子检测器来控制和调节各组织的钠[69][70]浓度。当饲料缺乏钠时，肾脏对钠的重吸收率非常高。1.6.5氯氯通常以可溶性盐的形式添加在饲料中。释放出带负电荷的离子以供吸收。氯是参与调节体内渗透压的主要阴离子。占细胞外液总阴离子的60%以上。在维持强离子差方面，[71]与钠、钾有着密切的关联。同时还是转运二氧化碳和氧所必需的。氯是参与蛋白质消化的胃分泌物的主要阴离子。氯的调控与钠关系密切。氯的贮留是通过减少肾脏氯的排泄、[72]降低粪便和奶中氯的含量而完成的。在泌乳中的母牛，大量氯通过粪便排除体外。普遍情况下，与阳离子相比，细胞外液中的阴离子的调节居于次位。当氯含量超出肾脏重吸收[73]能力时，多余的氯随尿排出。1.6.6钾钾在体内贮存的量很少，所以钾必须每天由饲料中提供。钾是动物所需量最多的阳离子矿物质。钾参与体内渗透压和酸碱平衡的调节。调节水的平衡、神经冲动的传导、肌肉收缩、氧气和二氧化碳的转运。在细胞摄入氨基酸和合成蛋白质、碳水化合物的代谢和肾8 [74]组织的机能方面发挥作用。钾主要在十二指肠中通过简单扩散方式被吸收，一部分在空肠、回肠和大肠吸收。多余的钾主要经肾排出。1.6.7硫动物体内硫含量约为0.15%。奶牛对饲料硫的摄取主要是用于提供充足的瘤胃微生物发酵底物，以确保最大的微生物蛋白质合成。通常，饲料中蛋白质的浓度与饲料含硫量有[75]密切关系。在临产奶牛的饲料中添加硫酸根离子，可以调节饲料阴阳离子平衡，防治发生产后截瘫。1.7日粮阴阳离子平衡日粮阴阳离子差（dietarycation-aniondifference，DCAD）又称日粮阴阳离子平衡（dietarycation-anionbalance，DCAB）。意思是，日粮中，每公斤干物质所含主要阴阳离子毫摩尔数之差，即为DCAD的值。DCAD计算公式：单位（meq/kgDM）DCAD=[(Na%/0.0023)+(K%/0.0039)]—[(Cl%/0.00355)+(S%/0.0016)]正常情况下，机体中体液pH是一个稳定的范围。但日粮离子水平对体内的酸碱平衡可以产生影响。为了维持内环境稳定，机体会排出多余的阴阳离子。如果摄入量增加，则会影响到机体酸碱平衡。饲料中致酸物质摄入过多则会改变体内酸碱环境。其中影响力较强的矿物质常量元素是Na、K、Cl。因此，饲料的DCAD值对体内酸碱平衡起到决定性的影响。当DCAD为正时，体液环境偏碱性。当DCAD为负时，体液环境偏酸性。添加阴离子诱导轻度代偿性酸中毒。研究表明，产前饲料中添加阴离子可以防止乳热[76,77]的发生。铵、钙、镁的氯化物和硫化物用作制酸离子已获成功。氯化物比硫化物的致[78]酸性更强。已经证明，产前一周监测奶牛尿液pH值是评估产前饲料中添加阴离子作用[79,80]的有效方法。在荷斯坦奶牛的饲料添加有效阴离子后，尿液pH值降低到6.2-6.8。根据DCAD计算方法，将饲料的DCAD值降到0以下，才能使奶牛达到适宜的酸化效果。然而，这些目标值并不肯定，而且在干奶牛饲料中添加阴离子盐时应少量添加，直到达到适宜的尿液pH值为止。在饲料DCAD值调整48-72h后，就可以对尿液pH值进行检测。1.8目的和意义对甘肃某牛场胎衣不下发病率和发病规律影响因素进行调查分析，探讨其与奶牛胎衣9 不下发生的关系。采用在饲料中添加改良配方后的阴离子盐的方法，观察阴离子盐对奶牛胎衣不下的防治效果，以及阴离子盐对围产期奶牛尿液pH、部分血清指标和生产性能的影响。为进一步扩大应用阴离子盐防治胎衣不下发生提供理论支持。降低由胎衣不下引起的经济损失，提高牛场生产效益。10 第二章奶牛胎衣不下发病情况及影响因素调查2.1材料与方法2.1.1实验动物实验在甘肃某牛场四分厂进行。四分厂共存栏1100头奶牛，本实验对614头奶牛在2013年10月至2014年9月的分娩情况进行流行病学调查。2.1.2实验方法记录四分厂614头奶牛在2013年10月至2014年9月分娩情况，即分娩季节、胎次、妊娠时间、流产或难产、子宫感染情况、胎儿体重、胎儿性别、单双胎。详细记录后，统计整理，以便后续分析。母牛分娩后胎衣在正常时限内胎衣不排出就叫胎衣不下或胎衣滞留。正常情况下，母牛分娩后3-5小时即可自行排出胎衣，如经8-12小时仍未排出胎衣即可认为胎衣不下。2.1.2.1分娩季节统计分娩季节时，为了保证全面调查季节与RFM的关系，首先分12个月逐月调查，再统计四个季节对RFM的影响，四季按照3、4、5月为春季，6、7、8月为夏季，9、10、11月为秋季，12、1、2月为冬季划分。2.1.2.1胎次记录胎次时，结合牛场对分娩奶牛的原始记录，分为头胎、二胎、三胎、四胎、五胎以上，再统计数据，得出结果。2.1.2.1妊娠时间奶牛正常妊娠时间一般为270-285天，据此将数据分为小于270天、270-285天、大于285天三组进行统计后，再分析与RFM可能的关系。2.1.2.1胎儿体重胎儿标准体重范围是35-45kg，因此将胎儿体重数据分为小于35kg、35-45kg、大于45kg三组统计分析与RFM的关系。11 2.1.3统计分析将调查记录的胎次、分娩季节、妊娠时间、流产或难产、子宫感染情况、胎儿体重、胎儿性别、单双胎数据情况excel初步整理，再通过spass16.0中T检验进行统计分析，得出结果，判断各因素与RFM的关系。2.2结果与分析2.2.1奶牛胎衣不下与分娩季节的关系从表2.1中可以看出，一年12个月份当中7月RFM发病率最高，为47.9%，3月RFM发病率最低，为22.9%。6-9月与3月发病率差异极显著，6、7、9月与1、5、10、11月之间差异显著，其他个月份之间RFM发病率差异不显著。12个月发病率变化趋势情况，见图2.1。从表2.2可以看出，季节对RFM发病率有着明显的影响，春、夏、秋、冬发病率分别为25.00%、42.52%、30.77%、32.37%。夏天RFM发病率显著高于春、秋、冬三季，但这三季之间差异不显著。夏季发病率最高，春天发病率最低，变化趋势见图2.2。表2.1奶牛胎衣不下各个月份发病率Table2.1TheincidencesofRFMindifferentmonths月份101112123分娩头数224558536248发病头数61122151911aaA发病率（%）27.2024.7037.9028.3030.6022.90月份456789合计分娩头数634945487447614发病头数151419232919203aBbBbBBb发病率（%）23.8028.6042.0047.9039.2040.4033.06注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）12 表2.2奶牛胎衣不下与季节的关系Table2.2TheincidencesofRFMindifferentseasons季节春季夏季秋季冬季合计分娩头数160167114173614发病头数40713656203BABB发病率（%）25.0042.5230.7732.3733.06注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）图2.1奶牛胎衣不下各个月份发病率Fig.2.1TheincidencesofRFMindifferentmonths图2.2奶牛胎衣不下与季节的关系Fig.2.2TheincidencesofRFMindifferentseasons13 2.2.2奶牛胎衣不下与胎次的关系从表2.3可以看出，2胎发病率最低，为22.76%，1胎次之，为23.98%，3胎以后发病率呈上升趋势，5胎及以上发病率最高，为43.94%。1胎、2胎发病率与4胎、5胎及以上发病率差异极显著，组间差异不显著。1胎、2胎与3胎之间差异显著，3胎与5胎及以上之间差异显著。从图2.3可以看出，随着胎次的增加，RFM发病率呈显著上升趋势。表2.3奶牛胎衣不下与胎次的关系Table2.3TheincidencesofRFMindifferentparity胎次1胎2胎3胎4胎5胎以上合计分娩头数14612313974132614发病头数3528523058203AcAcadBBb发病率（%）23.9822.7637.4140.5443.9433.06注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）图2.3奶牛胎衣不下与胎次的关系Fig.2.3TheincidencesofRFMindifferentparity2.2.3奶牛胎衣不下与妊娠时间的关系从表2.4可以看出，早产RFM率为51.78%，正常妊娠时间段内发病率为30.78%，妊娠期在285天以上的发病率为35.41%。早产RFM发病率远高于正常妊娠期内和超出正常妊娠期范围的奶牛，早产奶牛发病率与正常妊娠期奶牛发病率差异极显著，285天以上的14 与正常妊娠期的发病率差异不显著，变化趋势见图2.4。表2.4奶牛胎衣不下与妊娠时间的关系Table2.4TheincidencesofRFMindifferentpregnancytime妊娠时间小于270天270-285天大于285天合计分娩头数5651048614发病头数2915717203AB发病率（%）51.7830.7835.4133.06注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）图2.4奶牛胎衣不下与妊娠时间的关系Fig.2.4TheincidencesofRFMindifferentpregnancytime2.2.4奶牛胎衣不下与流产、难产的关系从表2.5可以看出，流产、难产、顺产的RFM发病率分别为42.50%、39.44%、30.02%，流产、难产RFM发病率与正常顺产发病率差异均显著。流产、难产的发病率明显高于顺产，见图2.5。表2.5奶牛胎衣不下与流产、难产的关系Table2.5TheincidencesofRFMincalvingdifficultyorabortion项目顺产难产流产合计分娩头数5037140614发病头数1522817203abb发病率（%）30.0239.4442.5033.06注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）15 图2.5奶牛胎衣不下与流产、难产的关系Fig.2.5TheincidencesofRFMincalvingdifficultyorabortion2.2.5奶牛胎衣不下与子宫是否感染的关系从表2.6可以看出，妊娠期间奶牛子宫未感染和受到感染的RFM发病率为31.87、42.05%，差异显著。奶牛子宫受到感染的RFM发病率显著高于子宫未感染的奶牛，见图2.6。表2.6奶牛胎衣不下与子宫是否感染的关系Table2.6TheincidencesofRFMinuterineinfectionoruterinenon-infection项目未感染感染合计分娩头数54668614发病头数17429203ab发病率（%）31.8742.0533.06注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）2.2.6奶牛胎衣不下与胎儿体重的关系从表2.7可以看出，犊牛体重在45kg以上、35kg以下与正常体重范围内的RFM发病率差异显著，但两组之间差异不显著。犊牛体重45kg以上的RFM发病率最高，35kg以下的其次，正常犊牛体重范围内的发病率最低，见图2.7。16 图2.6奶牛胎衣不下与子宫是否感染的关系Fig.2.6TheincidencesofRFMinuterineinfectionoruterinenon-infection表2.7奶牛胎衣不下与胎儿体重的关系Table2.7TheincidencesofRFMindifferentbirthweight胎儿体重小于35kg35-45kg大于45kg合计分娩头数5748275614发病头数2115329203bab发病率（%）36.8431.7438.6733.06注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）图2.7奶牛胎衣不下与胎儿体重的关系Fig.2.7TheincidencesofRFMindifferentbirthweight17 2.2.7奶牛胎衣不下与胎儿性别的关系从表2.8可以看出，产公犊和产母犊时RFM发病率分别为33.62%、32.72%，差异不显著，发病率相近，见图2.8。表2.8奶牛胎衣不下与胎儿性别的关系Table2.8TheincidencesofRFMindifferentsex胎儿性别公犊母犊分娩头数232382发病头数28125发病率（%）33.6232.72注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）图2.8奶牛胎衣不下与胎儿性别的关系Fig.2.8TheincidencesofRFMindifferentsex2.2.8奶牛胎衣不下与单双胎的关系从表2.9可以看出，双胎RFM发病率高达66.67%，单胎RFM发病率为32.04%，差异极显著。双胎RFM发病率明显高于单胎，见图2.9。表2.9奶牛胎衣不下与单双胎的关系Table2.9TheincidencesofRFMindifferentembryonumber单双胎单胎双胎合计分娩头数59618614发病头数19112203AB发病率（%）32.0466.6733.06注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）18 图2.9奶牛胎衣不下与单双胎的关系Fig.2.9TheincidencesofRFMindifferentembryonumber2.3讨论2.3.1奶牛胎衣不下与分娩季节的关系从调查结果可以看出，季节是RFM的重要影响因素。RFM发病率7月最高，为47.90%，3月份最低，为22.9%，差异极显著。7月发病率最高，由于甘肃昼夜温差较大，对妊娠奶牛产生强刺激，引起RFM发生。9月发病率也较高的原因可能在于，处于季节更替过度时期的适应过程。其他几个月份之间的显著差异性上，考虑原因为季节性。从季节上看，发病率从高到低为夏、冬、秋、春。夏冬两季高于其他季节，这与邬纯鸿等[81]调查结果一致。夏季温度高，气候炎热，对于奶牛是热应激。热应激会引代谢紊乱，导致抵抗力下降，与报道一致。甘肃地区，冬季寒冷漫长，会引起冷应激，子宫收缩力减弱。冷热应激会引起内分泌失调，血管扩充供血过多。腺窝内绒毛膜膨胀，胎衣排出困难。而且冬季饲料较单一，采食量减少也是RFM发病率较高的原因之一。2.3.2奶牛胎衣不下与胎次的关系胎次对RFM发病率具有较大影响。1、2胎与4、5胎差异极显著。从数据上也可以看出，随着胎次增加，发病率呈递增趋势。主要原因是，随着胎次的增加生殖机能下降。还有部分原因是，年龄增长的同时，会伴有疾病的发生，影响RFM发病率。1胎率发病率大于2胎，头胎难产率较高是部分原因。总体上还可以看出，初产奶牛低于经产奶牛。同时，提示牛场加强产后奶牛护理。增强对产后奶牛的保养，对于奶牛提高产犊率有重要19 意义。2.3.3奶牛胎衣不下与妊娠时间的关系妊娠时间小于270天，即为早产，发病率为51.78%，极显著高于正常妊娠时间的30.78%。怀孕超过285天的发病率为35.41%，虽有增高，但差异不显著。正常情况下，胎盘在满期前2-5天成熟。结缔组织胶原化，变湿润。早产时，胎盘发育不成熟，激素调控紊乱，增加分离难度。还有就是体液也未成熟。妊娠时间大于285天是RFM发病率虽然不显著，但也升高。可能与肉阜过度生长有关。与缺乏VA、肾上腺垂体发育不完全也不无关系。提前退化也可能引起RFM。还有研究证实，早产是激素代谢紊乱与RFM发生有关。2.3.4奶牛胎衣不下与流产、难产的关系流产、难产引起的RFM发病率分别为42.50%、39.44%，与顺产的30.02%差异显著。难产会使RFM易发，尤其是初产奶牛。分娩时间被延长，肌肉疲劳。母子胎盘之间充血、水肿更加大了胎衣排出的难度。流产时，胎盘上皮不能及时变性坏死，雌激素不足，[82][83]孕酮含量高。商云霞也曾报道，流产是增加RFM发病率的一个原因。2.3.5奶牛胎衣不下与子宫是否感染的关系因子宫感染而引起的RFM发病率为42.05%，与正常相比差异显著。子宫感染后会继发胎盘组织受损发炎。发炎后会引起母子胎盘黏连，诱发RFM。其他报道也已证实。2.3.6奶牛胎衣不下与胎儿体重的关系正常胎儿体重范围内的RFM发病率为31.74%，低于正常范围的发病率为36.84%，高于正常范围的发病率为38.67%。与其他因素相比，二者与正常范围内的发病率虽然比较相近，但差异显著。胎儿体重小于35kg时，发育为完全成熟。胎儿过轻引起的RFM还有一个原因就是与早产有关。也有研究证明，胎儿体重低于正常范围是早产的一种形式，早产是RFM的主要诱因。而当胎儿体重过大时，母畜涉及用力持久过度，子宫乏力引起。也已有报道证实。2.3.7奶牛胎衣不下与胎儿性别的关系公犊、母犊对RFM的影响从调查结果来看并不明显。调查显示，公犊引起的发病率20 [84]略高于母犊。原因可能公犊普遍体重大于母犊。这与高清友的报道相似。2.3.8奶牛胎衣不下与单双胎的关系从调查结果不难看出，双胎引起的RFM发病率66.67%，极显著高于单胎的32.04%，甚至是其的两倍。奶牛的双胎虽然不常见，但RFM发生率极高。有报道称，双胎会缩短妊娠期，因此发育不健全是引起RFM的一个因素。再有双胎生产过程较长，更持久费力，母体损耗大。长久持续的过程中，容易引起激素的紊乱，雌激素不足，孕酮过高等。罗军平、刘智喜等实验也验证了这个因素对RFM的显著影响。2.4小结1)季节对RFM发病率影响显著，7月份最高，3月份最低。夏季显著高于其他季节。2)随着胎次的增加RFM发病率显著增加。3)早产、正常范围外胎儿体重、流产、难产、子宫感染显著增加RFM发病率。4)胎儿性别对RFM发病率的影响不显著。5)双胎极显著的增加RFM的发病率。21 22 第三章阴离子日粮对胎衣不下的影响RFM发病率一般在20%左右，我国大部分情况可能稍有偏高。奶牛四分厂年平均发病率已经达到33.06%，个别月份甚至更高。为了降低RFM发病率，提高奶牛生产性能，现将奶牛四分厂干奶期饲料配方进行更改。在2014年10-12月期间，在奶牛四分厂干奶期精料预混料中添加阴离子盐。为了探究阴离子盐对RFM的防治效果，选取与奶牛四分厂RFM发病率等各方面条件都相似的五分场进行分组对比试验。五分场为常规日粮试验场，并统计两个牛场RFM发病率。3.1材料与方法3.1.1试验材料试验材料是分别来自甘肃某牛场四分厂和五分场干奶期妊娠奶牛的饲料。试验饲料配方见表。其中，奶牛四分场精料预混料A中添加改良后的阴离子盐（主要原料为：硫酸铜、硫酸锌、硫酸锰、碘化钾、氯化钴、亚硒酸钠、磷酸氢钙、石粉、盐、VA、VD3、VE等，下同），五分场B是常规日粮。饲料精粗比约为30%：70%。两牛场分别在分娩前21天开始区别饲喂不同日粮，直至分娩当天。3.1.2试验动物两牛场将在2014年10-12月分娩的奶牛。四分厂的为试验组，五分场的为对照组。表3.1精料配料明细单（每500kg）Table3.1Cowsfourbranchconcentratedetailedlistofingredients(per500kg)原料玉米豆粕棉籽粕DDGS麸皮所占比例（%）20.0022.0022.0019.004.00数量100.00110.00110.0091.0020.00可立吸霉菌原料糖渣益生酵母斯多利预混料A/B吸附剂所占比例（%）1.000.0080.0060.00610.00数量5.004.003.003.0050.0023 表3.2干奶牛群投料单（kg/头）Table3.2Drydairyherdfeedinglist(kg/perhead)干塘原料精料青贮苜蓿酒糟糖蜜棉粕燕麦合计渣产前21d5.0012.001.000.502.000.500.023.0024.203.1.3主要仪器40目分样筛、电热恒温鼓风烘箱DHG9420B、粉碎机FSD100A、上分原子吸收分光光度计361MC、上分分光光度计721G、哈纳pH测定仪HI98103D。3.1.4试验方法3.1.4.1DCAD测定在烘箱中105℃烘干3h,放置室内恢复至风干状态，再用植物粉碎机粉碎，过40++目筛，收集草粉样品待测。Na、K含量在参照国标(GB/T13885-2003/ISO6869:2000)-用原子吸收光谱法测定。Cl含量的测定参照（GB/T6439-92）饲料中水溶性氯化物的2-测定方法，S含量的测定参照国标（GB/T17776-1999）饲料中硫的测定硝酸镁法，并按各自样品的干物质含量折算出干物质基础数据。DCAD计算公式：单位（meq/kgDM）DCAD=[(Na%/0.0023)+(K%/0.0039)]—[(Cl%/0.00355)+(S%/0.0016)]3.1.4.2发病率调查分别对奶牛四场、五场的分娩奶牛2014年10-12月RFM发病率进行统计。3.1.5统计分析数据以均值±标准差表示。统计数据通过SPSS16.0T检验进行分析。3.2结果与分析3.2.1DCAD的计算由表3.3可以看出，饲料中各个离子含量，由此可计算出DCAD的值。通过计算，四分场DCAD为−68.32meq/kgDM，五分场DCAD为33.02meq/kgDM。24 表3.3饲料中各个离子含量Table3.3Eachioncontentinfeed四分场（%）五分场（%）K0.3590.367Na0.9620.936Cl0.7720.589S0.3910.3213.2.2胎衣不下发病率对比从表3.4和表3.5显示结果可以看出：10-12月份中饲喂饲料中含有阴离子盐的四分场RFM发病率低于五分场，且呈下降趋势。而且还可以从四分场的RFM发病率结果可以看出，阴离子盐同时抑制了季节变化对RFM的影响。经T检验得出，两牛场RFM发病率差异显著，p＜0.05。表3.4四分场胎衣不下发病率Table3.4TheincidencesofRFMinthefouthbranch月份101112合计分娩头数304851129发病头数710825发病率（%）23.3320.8315.6819.38表3.5五分场胎衣不下发病率Table3.5TheincidencesofRFMinthefifthbranch月份101112合计分娩头数345237123发病头数10141337发病率（%）29.4126.9235.1330.08从图3.1可以看出，四分场的RFM发病率无论是与去年同期还是与对照组五分场的RFM发病率相比，均呈下降趋势。五分场和四分场去年同期变化趋势相似，符合季节引起的冷热应激RFM的发病规律。25 图3.1胎衣不下发病率对比图Fig.3.1TheincidencesofRFMcompareFigure3.3讨论3.3.1饲料中离子对DCAD的影响饲料的DCAD值对体内酸碱平衡起到决定性的影响。当DCAD为正时，体液环境偏碱性。当DCAD为负时，体液环境偏酸性。四分场DCAD为−68.32meq/kgDM，五分场DCAD为33.02meq/kgDM。从两个牛场饲料离子含量中可以看出，四分场阳离子减少，阴离子含量增加。其中，钾在体内贮存的量很少，所以必须每天由饲料中提供。钾是动物所需量最多的阳离子矿物质。因此，可以看出饲料中钾含量变化相对较小，以保证动物机体对钾的摄取。但若饲料中钾含量较高，会影响镁的吸收，导致痉挛。氯通常以可溶性盐的形式添加在饲料中。释放出带负电荷的离子以供吸收。氯是维持酸碱平衡的重要离子。[85]同时影响产奶量。有学者建议，在饲料中氯含量应多于钠，因为乳中其含量是钠的两倍。这与结果中测得的饲料含量不尽相同，还有待进一步研究试验。因此，合理利用阴阳离子平衡至关重要。3.3.2DCAD对奶牛胎衣不下的影响从数据和图中不难看出，阴离子盐对于防治RFM发生有着显著的作用。原因在于引起机体代偿性轻微酸中毒。启动体内钙的调节机制，达到动用骨钙、稳定血钙的目的，还可增加肠钙的吸收。降低低血钙的发生，增强子宫收缩力。本试验另外设计对照，对两个试验牛场的奶牛血清进行检测。通过对血钙含量的对比，验证阴离子日粮对钙吸收的影响。26 从而达到了降低RFM发病率的目的。3.4小结1)四分场饲料DCAD为−68.32meq/kgDM，为阴离子型饲料。五分场饲料DCAD为33.02meq/kgDM，为阳离子型饲料。2)阴离子盐显著降低了RFM的发病率。27 28 第四章阴离子盐对围产期奶牛尿液pH、部分血清指标和生产性能的影响通过调整饲料中阴阳离子含量，使DCAD为负值，可以降低RFM发病率并起到防治作用。为了进一步探究饲料中添加阴离子盐对围产期奶牛机体和生产性能的影响，对试验奶牛尿液pH、血清进行检测并统计两个牛场乳热发病率、试验奶牛泌乳量。尿液pH检测观察阴离子盐对体液酸碱平衡的影响。检测血清中矿物质研究阴离子盐的添加对机体矿物质代谢的影响。GOT、GPT的检测观察阴离子盐对奶牛肝功能是否有所影响。PTH、1,25-(OH)2D3的检测，研究阴离子盐对钙的调节作用。通过对乳热发病率和泌乳量的调查统计，了解阴离子盐对奶牛生产性能的影响。因此，为阴离子盐进一步扩大应用提供理论依据。4.1材料与方法4.1.1试验材料试验材料是分别来自甘肃某牛场四分场和五分场干奶期妊娠奶牛的饲料。试验饲料配方、饲喂情况同第三章。其中，奶牛四分场精料预混料A中含有阴离子盐，五分场B是常规日粮。饲料精粗比约为30%：70%。两牛场分别在分娩前21天开始区别饲喂不同日粮，直至分娩当天。分娩后饲喂相同围产后期日粮。4.1.2试验动物分别在两个奶牛场选择10头将在2014年10-12月分娩的奶牛。要求妊娠时间、胎次、体况、采食量、上一泌乳期产奶量等均相似的健康妊娠奶牛。奶牛四分场的为试验组，五分场的为对照组。4.1.3试验方法4.1.3.1尿液pH检测在饲喂试验饲料3天后，每3天检测收集一次试验动物新鲜尿液，立即检测pH值，直至分娩当天，记录。4.1.3.2血清测定试验组和对照组分别在分娩前7天（-7d）、5天（-5d）、3天（-3d）颈静脉采血，29 分离血清。冷冻保存，待测。在分娩后1天（1d）颈静脉采血分离血清。要求不能接受任何药物治疗。待测血清送往当地医院进行测定。主要检测矿物质中的K、Na、Cl、Ca、P、Mg，肝功的GOT、GPT，以及PTH、1,25-(OH)2D3。4.1.3.3乳热及产奶量统计对两个牛场分娩后乳热发病率进行统计。同时统计分娩后60天内泌乳量。4.1.4统计分析数据以均值±标准差表示。统计数据通过SPSS16.0软件T检验进行分析。4.2结果与分析4.2.1尿液pH值测定从表4.1可以看出，五分场妊娠奶牛尿液平均为7.74±0.16，偏碱性。四分场妊娠奶牛尿液pH平均为6.81±0.34，偏酸性。通过T检验，两组差异极显著，p＜0.01。从图4.1可以看出，五分场妊娠奶牛尿液pH稳定。四分场妊娠奶牛尿液pH基本呈下降趋势，饲喂12天后明显降低，直至分娩。含有阴离子盐的饲料明显降低了妊娠奶牛尿液pH值。表4.1试验奶牛尿液pH值Tab4.1TheurinarypHvalueofthetesteddairycows检验天数四分场五分场37.62±0.287.75±0.2167.37±0.427.73±0.1497.12±0.337.65±0.23127.68±0.277.53±0.11AB156.61±0.318.02±0.37AB186.57±0.147.76±0.15AB216.54±0.207.77±0.28AB平均值6.81±0.347.74±0.1630 图4.1试验奶牛尿液pH值Fig.4.1TheurinarypHvalueofthetesteddairycows4.2.2阴离子盐对矿物质K、Na、Cl、Ca、P、Mg的影响从表4.2中可以看出，四分场和五分场奶牛血清中K、Na、Cl含量差异均不显著（p0.05），含量变化如图4.2、4.3、4.4。表4.2血清中钠、钾、氯含量（mmol/L）Table4.2Natrium,KaliumandChlorinumcontentinserium（mmol/L）KNaCl四分场（-7d）4.22±0.21138.43±4.89114.87±7.69四分场（-5d）4.29±0.14139.51±5.27112.94±9.42四分场（-3d）4.33±0.16141.51±5.33109.37±8.53四分场（1d）4.75±0.15143.45±7.27104.68±9.80五分场（-7d）4.23±0.12138.41±5.32113.25±8.63五分场（-5d）4.39±0.15140.11±5.68108.99±6.40五分场（-3d）4.42±0.11140.78±6.34106.21±6.45五分场（1d）4.87±0.14142.54±6.21101.47±8.03注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）31 图4.2血清中钠含量（mmol/L）Fig.4.2Natriumcontentinserium（mmol/L）图4.3血清中钾含量（mmol/L）Fig.4.3Kaliumcontentinserium（mmol/L）图4.4血清中氯含量（mmol/L）Fig.4.4Chlorinumcontentinserium（mmol/L）从表4.3可以看出，两分场妊娠奶牛血清中P、Mg含量差异不显著。分娩前，血清中Ca含量差异显著（p0.05）。分娩后，血清中Ca含量差异极显著（p0.01）。32 从图4.5可以看出，四分场奶牛血清中Ca含量高于五分场。两个试验组分娩前至分娩后Ca含量均呈下降趋势。四分场血钙含量下降趋势平缓。五分场在分娩前5天开始血钙明显降低，前3天下降趋势更加显著，直至分娩。血清中P、Mg含量见图4.6、4.7。表4.3血清中钙、磷、镁含量（mg/dl）Table4.3Calcium,PhosphoniumandMagnesiumcontentinserium（mg/dl）CaPMga四分场（-7d）10.33±0.237.37±0.342.27±0.23a四分场（-5d）10.03±0.117.26±0.072.24±0.15a四分场（-3d）9.76±0.427.21±0.152.18±0.06A四分场（1d）8.95±0.627.16±0.532.09±0.05b五分场（-7d）9.92±0.157.32±0.132.17±0.13b五分场（-5d）9.70±0.387.21±0.062.14±0.80b五分场（-3d）8.86±0.817.18±0.322.11±0.24B五分场（1d）6.73±0.677.14±0.502.04±0.06注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）图4.5血清中钙含量（mg/dl）Fig.4.5Calciumcontentinserium（mg/dl）33 图4.6血清中磷含量（mg/dl）Fig.4.6Phosphoniumcontentinserium（mg/dl）图4.7血清中镁含量（mg/dl）Fig.4.7Magnesiumcontentinserium（mg/dl）4.2.3阴离子盐对GOT、GPT的影响从表4.4可以看出，分娩前后血清中GOT、GPT含量变化不大，差异不显著（p＞0.05）。还可以看出两组之间差异很小，GPT数值相近，见图4.8、4.9。4.2.4阴离子盐对PTH、1,25-(OH)2D3的影响从表4.5可以看出，分娩前，血清中PTH含量差异显著（p0.05）。分娩后，血清中PTH含量差异极显著（p0.01）。两组奶牛血清中1,25-(OH)2D3含量差异显著（p0.05）。从图4.10可以看出，四分场奶牛血清中PTH含量低于五分场。两组PTH含量均呈增加趋势，分娩前3天至分娩后1天，增加趋势明显。从图4.11可以看出，分娩前后，四分场奶牛血清中1,25-(OH)2D3含量均显著高于五34 分场。表4.4GOT、GPT变化表(U/L)Table4.4GOTandGPTcontent(U/L)GOTGPT四分场（-7d）93.78±6.4325.15±0.66四分场（-5d）94.92±7.7524.94±0.57四分场（-3d）96.59±5.8224.73±0.46四分场（1d）99.49±5.4323.95±0.81五分场（-7d）88.56±5.1726.17±0.73五分场（-5d）89.46±4.8825.93±1.44五分场（-3d）92.39±4.1224.85±0.58五分场（1d）96.17±2.3324.52±0.57注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）图4.8GOT变化表(U/L)Fig.4.8GOTcontent(U/L)35 图4.9GPT变化表(U/L)Fig.4.9GPTcontent(U/L)表4.5PTH、1,25-(OH)2D3含量Table4.5PTH、1,25-(OH)2D3contentPTH（pmol/L）1,25-(OH)2D3（ng/mL）aa四分场（-7d）188.53±35.6930.31±6.23aa四分场（-5d）196.89±39.1430.40±6.97aa四分场（-3d）207.26±32.6030.43±6.87Aa四分场（1d）243.00±25.7930.52±7.24bb五分场（-7d）227.83±31.6822.96±7.66bb五分场（-5d）232.20±34.9023.00±7.85bb五分场（-3d）242.75±33.7723.14±7.49Bb五分场（1d）286.49±27.3223.21±7.03注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）36 图4.10PTH含量Fig.4.10PTHcontent图4.111,25-(OH)2D3含量Fig.4.111,25-(OH)2D3content4.2.5阴离子盐对乳热和泌乳量的影响从表4.6、4.7可以看出，在试验的3个月中，四分场129头分娩奶牛中仅发生1例乳热，发病率为0.78%；五分场123头分娩奶牛中共有5头发病，发病率为4.07%，差异极显著（p0.01）。从图4.12可以看出，四分场乳热发病率明显低于五分场。从表4.8可以看出，两个牛场的试验组妊娠奶牛分娩后60天内泌乳量明显不同。试37 验组极显著高于对照组（p0.01），泌乳性能相对较高。四分场添加阴离子盐后平均日泌乳量达到34.00kg，五场饲料饲喂正常日粮，为28.73kg。表4.6四分场乳热发病率Table4.6TheincidencesofMilkfeverinthefouthbranch月份101112合计分娩头数304851129发病头数0011发病率（%）001.960.78表4.7五分场乳热发病率Table4.7TheincidencesofMilkfeverinthefifthbranch月份101112合计分娩头数345237123发病头数1225发病率（%）2.943.855.414.07图4.12乳热发病率Fig.4.12TheincidencesofMilkfever38 表4.8分娩后60天内平均泌乳量（kg）Table4.8Average60dayspostpartumlactation（kg）编号四分场五分场133.1026.56232.8227.07333.5528.11434.7929.77535.2730.21635.8830.09734.2828.73834.1128.81933.7128.641032.5629.37AB均值34.00±1.0828.73±1.22注：无上标表示差异不显著（p＞0.05），上标不同小写字母表示差异显著（p＜0.05），上标不同大写字母表示差异极显著（p＜0.01）4.3讨论4.3.1阴离子盐对奶牛尿液pH的影响阴离子盐对机体体液酸碱平衡的调控可以从尿液pH的变化中得到反馈。一般情况下，饲料代谢分解，经过肾脏滤过重吸收以后排出，尿液pH偏碱性。通常尿液pH在8.0左右。饲料中不含阴离子盐的五分场妊娠牛尿液pH在7.78左右，与上述符合。已有很多实验证[86,87]实强离子差理论，阴离子被吸收后会分泌氢离子。从而降低尿液pH，再加上含有阴离子盐的饲料为阴离子型饲料，会引起机体轻度酸中毒。Charbonneau等认为,干奶后期尿液[88]pH范围在5.5-6.5之间是较适宜的。本试验中，尿液pH从7.37降到6.54，平均值为6.81.稍高于适宜范围的可能原因是饲喂时间短。还有就是阴离子比例稍低，可以尝试降到DCAD水平。但尿液pH不能低于4.5，否则会损伤肾功能。4.3.2阴离子盐对矿物质K、Na、Cl、Ca、P、Mg的影响在几种矿物质的检测中，只有Ca的含量显著升高，其他均不显著。分娩后，血清钙含量升高极显著，与分娩过程中钙大量流入初乳有关。阴离子盐主要通过改善机体酸碱平39 衡，使妊娠母畜处于代偿性酸中毒情况。从而调节Ca的代谢。这可能是其他指标差异不显著的原因。低血钙症常见于围产期奶牛。由于产前低血钙导致肌肉运动机能下降，从而导致产犊时子宫平滑肌收缩无力，致使产后出现胎衣不下。同时，出现低血钙后，骨骼肌、瘤胃平滑肌、乳头也会相应的出现一些问题。然而阴离子盐可以改善低血钙的问题。四分场在饲料中添加了阴离子盐，使得饲料DCAD降为负值。上一章中得出，妊娠奶牛尿液pH从7.37降到6.54，从偏碱性变为偏酸性。反映出体液pH从碱性到酸性的改变。机体处于代偿性酸中毒状态。增强尿液钙的代谢，减少体内存留时间。反馈调节，增强骨骼钙的动用。还有助于肠道钙的吸收。同时，Ca含量的增加，有助于子宫平滑肌收缩。因此，可以降低RFM的发病率，与试验3.2得出的结果一致。4.3.3阴离子盐对GOT、GPT的影响GOT、GPT可以直接反应出肝脏功能是否受到影响。试验组和对照组检测值差异不显著。而且都在正常值范围内。表示通过在饲料中添加阴离子盐，调节机体酸碱平衡，对肝功能没有损害，可以日后推广使用。但当继续降低DCAD值，增加阴离子浓度时，需要再次进行肝功检测，以免引起肝脏功能性问题。4.3.4阴离子盐对PTH、1,25-(OH)2D3的影响奶牛血钙平衡受多方面调控，主要靠肠道钙和骨钙调节维持。PTH主要功能是影响体内骨钙的代谢。1,25-(OH)2D3则主要调节肠道钙。当血钙含量发生变化时，机体通过反馈调节，调整相应激素分泌。血钙的微量减少就可使PTH的分泌量增加。作用于肾小管，使钙的吸收增加。同时促进骨钙动员。还可以促进1,25-(OH)2D3在肾脏中合成，增强肠道钙的吸收。分娩后PTH明显高于分娩前，表明产前血钙下降明显。通过增加PTH的分泌，来调节血钙下降的趋势。1,25-(OH)2D3受血钙含量的调控的同时，也受PTH变化的正向影响。血钙降低时，其分泌增加，促进肠道钙的吸收。从而提升血钙浓度。四分场妊娠奶牛血清1,25-(OH)2D3含量高于五分场，与相关报道一致。由于阴离子盐的使用，缩短尿液钙在体内的时间。反馈调节加强PTH的合成和分泌。弱酸环境还利于PTH与PTH受体结合。4.3.5阴离子盐对乳热和泌乳量的影响在饲料里添加阴离子盐极显著的降低了乳热的发病率。乳热的发生与机体钙代谢紧密40 相关。妊娠奶牛分娩后，大量血钙转移到初乳中。血钙含量下降，又未得到及时补充，则容易引发乳热。上文中已经说明了饲料中添加阴离子盐对机体钙代谢的良性作用。因此可以降低乳热的发生，与Block、Oetzel等的报道一致。在统计时间内，试验奶牛都已达到泌乳高峰期。四分场分娩后奶牛60天内平均日泌乳量极显著高于五分场。产前饲喂含有阴离子盐的饲料对分娩后泌乳量有明显提高。阴离子盐对机体酸碱平衡的调节，改善了低血钙的不利影响。加快了奶牛分娩后的恢复速度。从而充分发挥泌乳性能。4.4小结1)饲喂含有阴离子盐饲料的母畜尿液pH值呈弱酸性。2)四分场和五分场相比，血清矿物质中试验组Ca含量显著高于对照组，其他均不显著。血清中GOT、GPT含量均差异不显著。证实阴离子盐对于肝脏功能没有损伤。四分场奶牛血清中PTH含量显著低于五分场，1,25-(OH)2D3含量显著高于五分场奶牛血清中的含量。3)饲喂阴离子盐，可有效减少乳热的发生，显著提高围产期奶牛产后泌乳量。41 42 结论1)季节对RFM发病率影响显著。胎次增加、早产、正常范围外胎儿体重、流产、难产、子宫感染均显著增加RFM发病率。双胎极显著增加了RFM的发病率。胎儿性别对RFM发生影响不大，差异不显著。2)饲喂阴离子盐可显著降低RFM的发病率。3)饲喂含有阴离子盐饲料的母畜尿液呈弱酸性。血清矿物质中试验组Ca含量显著高于对照组，其他均变化不显著。血清中PTH含量显著降低、1,25-(OH)2D3含量升高。饲喂阴离子盐，对于肝脏功能没有损伤，可有效减少乳热的发生，显著提高围产期奶牛产后泌乳量。43 44 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个人简历个人情况姓名：张璐莹性别：女民族：汉出生年月：1989年6月籍贯：黑龙江省哈尔滨市政治面貌：党员教育背景2008.09-2012．07黑龙江八一农垦大学动物科技学院农学学士学位动物医学专业2012.09-2015．07黑龙江八一农垦大学动物科技学院农学硕士学位兽医学专业在学期间发表论文[1]张璐莹，罗春海，许启有，付世新.牛乳溶菌酶的安全性评价，黑龙江八一农垦大学学报，2015，1（7）：29-32[2]张璐莹，聂甜甜，郑程远，付世新.牛乳溶菌酶概述及应用，吉林畜牧兽医，2013，33(12)：16-1953