microRNA-449a在小鼠神经病理性疼痛模型中的调控作用及其机制

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1、ｍ－ｉｃｒｏＲＮＡ４４９ａ在小鼠神经病理性疼痛模型中的调控作用及其机制Ｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｒｏｌｅｓａｎｄｒｅｌａｔｅｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆ－ｔｈ４４９ａｉｃａｉｎｍｏｄｅｌｓｍｉｎｔｈｅｍｏｕｓｅｎｅｕｒｏａｉｃｒｏＲＮＡｐｐ作者姓名：卢山专业名称：影像医学与核医学研究方向：放射医学基础理论指导教师；赵国庆教授学位类别：学术学位博士培养单位：吉林大学中日联谊医院１论文答辩日期：２０８年６月１日授予学位日期：年月日答辩委员会组成：姓名职称

2、工作单位主席房学东教授博士生导师中日联谊医院委员马庆杰教授博士生导师中日联谊医院姜洋教授博士生导师中日联谊医院巴彦青教授博士生导师东北师范大学王桂云教授博士生导师东北师范大学未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任俞单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此。限）。否则，应承担侵权的法律责任吉林大学博士学位论文原创性声明，，本人郑重声明

3、：所呈交学位论文是本人在指导教师的指导下独论立文进行研宂工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本文不包含任何其他个人或集体已经发表或己在撰写文过的作品成果。对本本人的完研全宂意做识出重要贡献的个人和集体，均中以明确方式标明。到本声明的法律学结位果论由文本作人者承签担。名：曰期：年ｔ（月以日中文摘要microRNA449a在小鼠神经病理性疼痛模型中的调控作用及其机制研究目的神经病理性疼痛（neuropathicpain,NP）又称为神经痛，已经成为了严重影响人类健康的疾病难题。研究认为，神经病理性

4、疼痛是因为外周或中枢神经系统的损伤或者功能紊乱导致的慢性疼痛所引起，其临床特征通常表现为为痛觉过敏、自发性疼痛或异常性疼痛等，目前对于神经病理性疼痛的发病机制尚不明确，也尚无有效的治疗方案。大量研究证实，神经病理性疼痛的发病机制复杂，可能与神经系统的外周神经感受器过敏、中枢神经痛感神经元异常重组以及传入神经的异位兴奋等因素密切相关。由于临床上缺乏有效的治疗方案，因此神经病理性疼痛难以有效根治，目前全球范围内的患者数量越来越多，而且由于剧烈的疼痛给患者带来巨大的身体和精神痛苦，已经成为不容忽视的难以治愈的健康问题。在临床上对于神经

5、病理性疼痛的治疗是以抗抑郁药、抗癫痫药以及局部麻醉剂为主，但是上述药物的疗效仍不理想，并且副作用严重，因此明确神经病理性疼痛的发病机制并加快高效低毒药物的研发，已经成为临床研究的热点领域。基因组的表达失衡是引起神经病理性疼痛的关键因素，从基因水平对疾病的发病机制进行阐述具有临床指导意义。miRNA是人体内的一类具有调控基因组表达功能的内源性因子，参与调控细胞的增殖凋亡，组织分化和功能维持等方面的作用，miRNA在真核细胞中发挥调控基因表达水平的作用，主要是通过与靶基因mRNA3’非编码区的结合来实现。miRNA一方面能够与细胞质

6、中的蛋白结合，形成RNA干扰沉默核糖核蛋白复合物，该复合物能够与靶基因mRNA发生互补而降解mRNA，从而抑制靶基因的蛋白转录；此外，miRNA也可以通过与mRNA的不完全互补抑制蛋白的转录。由于神经病理性疼痛本质上可以认为是神经系统对损伤做出的应激反应，所发生的病理改变与各种蛋白的表达密切相关，包括信号转导分子、神经递质、炎性因子和离子通道蛋白等。因此miRNA通过调控不同信号通路相关的蛋白表达，从而对神经病理性疼痛的病理进程发挥了不I同的调控作用。MiRNA其在肿瘤的作用以及机制的研究较为广泛，并且已经有部分研究进入临床应用

7、阶段，但是对于miRNA在神经系统中的作用及其机制研究相对匮乏，本研究采用生物化学、分子生物学、细胞生物学以及实验动物学等技术主要开展以下研究：（1）构建小鼠坐骨神经分支选择性损伤（sparednerveinjury，SNI）模型，采用微阵列芯片（microarray）技术检测背根神经节（DRG）中miRNA表达谱的变化，筛选鉴定其中具有显著差异的miRNA；（2）观察小鼠体内特定miRNA过表达后对神经病理性疼痛的影响及其机制；（3）通过体外细胞培养揭示特定miRNA调控DRG生物学行为的信号转导机制。研究方法1.采用坐骨神经

8、分支选择性损伤（SNI）法构建小鼠神经病理性疼痛模型，背根神经节（Dorsalrootganglia，DRG）从小鼠体内进行分离培养；2.SNI小鼠模型的动物行为学测定包括了机械性刺激诱发疼痛的行为学测定、热刺激诱发疼痛的行为学测定、冷刺激诱发疼痛的测定；3.使