流式基本原理

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1、1，流式细胞术原理-检测方式前向角散射光（FSC,Forward使用荧光标记的单克隆Scatter）抗体染色，做多色分析细胞相对大小及其表面积荧光信号的强弱，反映侧向角散射（SSC,SideScatter）了细胞抗原的表达含量细胞粒度及细胞内相对复杂性2，流式细胞术原理–计数白细胞分型:单一平台下的细胞计数FSCvs.SSCCD45vs.SSCCD45vs.SSCEosinophilsGranulocytesMonocytesPlateletsLymphocytes计算每毫升原始血液样本中四种不同细胞群的绝对细胞数

2、量CD45vs.Volume群体SSCGate细胞数量rPulled(mL)样本体积(mL)Cellsx103/mL正常范围淋巴细胞P560,827308.12,1004.150.8-5.0单核细胞P61,154308.12,1000.080.1-1.0粒细胞P726,618308.12,1001.811.4-7.5红细胞P32,478308.12,1000.170.0-0.43，流式细胞术原理–细胞周期•DNA量的周期变化检测----核酸染料标记（如PI）•特异周期调节蛋白检测----如CDK（细胞周期蛋白依赖的激酶）、

3、CKI（CDK抑制剂）等。4，细胞周期-实例细胞周期实验：PI的DNA染色方法:JurkatcellsweretreatedwitheitherDMSO(Control;<2%)orHU-331,anapoptosisinducingcannabinoid(5mg/mL),CaymanChemicalCompany,for6hours.CellswerethenfixedandstainedwithAccuriCellCyclePhaseDeterminationKit(KR-300).5，流式细胞术原理–细胞凋亡•在凋亡

4、的早期阶段,膜磷脂的不对称性丧失,导致膜内侧磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内层暴露于外层,从而可被PS特异的AnnexinV探针所标记。•PS转移到细胞膜外不是细胞凋亡特有的,也可发生在细胞坏死中。•但在凋亡的早期细胞膜是完整的,而细胞坏死时细胞膜的完整性，PI可以区分死细胞、活细胞。因此，PI/AnnexinV结合使用可分辨出凋亡细胞。6，细胞凋亡-实例AnnexinVData