三磷酸腺苷、二磷酸腺苷和一磷酸腺苷的毛细管电泳分析研究

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1、A57三磷酸腺苷、二磷酸腺苷和一磷酸腺苷的毛细管电泳分析研究周春喜郁荣吕海燕廖杰(解放军总医院医学实验测试中心，北京100853)摘要：考察了三磷酸腺苷，二磷酸腺苷和一磷酸腺苷在毛细管电泳中的分离行为，研究了运行缓冲液的pH值、磷酸盐浓度，分离电压、分离温度等因素对这3种化合物的迁移时间和分离效果的影响．结果发现，这些因素对上述3种化合物的分离有显著的影响。优化后的分离条件：运行缓冲液为25mfflOl，L磷酸盐(pH7．o)，分离电压为15kV，分离温度为25"C．三种物质在10分钟内全部出峰，方法的检出限为0．12

2、5切g／n1L，线性范围为0．125m咖L一2．0mg,'mL，相关系数为0．99l一0．997。关键词：毛细管电泳：ATP；ADP；AMP三磷酸腺苷(ATP)是机体的能量来源，在细胞的代谢活动中占有重要地位。腺苷酸池(A1咿+ADP+AMP)水平是描述细胞代谢的重要参数之一，测定组织中的腺苷酸含量具有重要意义。其测定方法主要为高效液相色谱法[1]，需耗用大量有机溶剂，费用高．且对环境有污染。本文研究了ATP、ADP及AMP在毛细管电泳中的迁移行为，并对其分析条件进行了优化。1实验部分f．1仪器与试耕P／ACEMDQ型

3、毛细管电泳仪带二极管阵列检测器(美国Beckman-Coulter公司)；未涂渍石英毛细管柱50umi．d．X50cm(有效长度40cm)(河北永年光纤厂)。ATP，ADP、AMP、磷酸二氢钠，磷酸氢二钠、磷酸钠、氢氧化钠等为国产分析纯试剂。所有缓冲液均以重蒸去离子水配制，并经0．45pm滤膜过滤。T．2操作步骤按要求配制缓冲液。采用压力进样方式(34kPa×5s)，正极进样，负极检测，检测波长254mn。每次进样前将毛细管柱依次用水、O．1mol／LNaOH、水、缓冲液各冲洗3rain。2结果与讨论2．1缓冲液的pH

4、值对分离的影响以浓度为100mmd／L，pH值分别为II．0，10．0。9．0，8．0，7．0及6．0的磷酸盐缓冲液为分离介质进行分离。发现在pH值为6．0—1I．O的范围内，所有峰均可基线分离．但迁移时间以pH值为7．0时为最短。这是由于当pH大于6时，管壁硅羟基的电高趋于饱和，电渗流变化平缓[2]，pH值的升高会显著地降低化合物的迁移速率。pH值的升高主要有两方面的作用：一是增大了水相的离子强度，降低了化合物的淌度；二是增大了这些化合物的电离度。使其负电荷密度增高。2．2缓冲液中磷酸盐的浓度对分离的影响以pH值为7

5、．0．浓度分别为25mmol／L，50mmol／L和100mmol／L的磷酸盐为分离介质，发现磷酸盐浓度升高时，迁移时间延长。这是由于磷酸盐浓度的增高增大了水相的离子强度而改变了化合物的淌度。磷酸盐的浓度在25mmol／L一100mmol／L的范围内．所有的峰均可基线分离。当磷酸盐的浓度为25mraol／L时迁移时间晟短。2．3分离电压对分离的影响用25mmol／L，pH7．0的磷酸盐缓冲液．采用不同的分离电压(分别为10kV，15kV，20kV和25kV)进行分离。结果发现，电压增大时，迁移时间随之缩短，相邻峰的分辨

6、率以15kV时为最大。电场强度的增大．使电渗流增大，迁移时间缩短，分离度增大；但场强过高时，焦耳热弓f起的峰扩展也更加明显。2．4分离温度对分离的影响固定其它条件。观察分离温度(15℃，25℃，35"C，45"C和55"C)对迁移时间和分离效果的影响。结果发现温度升高时，迁移时间缩短，相邻峰的分辨率以15℃时为最大，这是因为温度的升高使溶液的粘滞系数降低，溶质的扩散加快。从方便仪器操作的角度考虑，选择分析效果较好而又接近室温的25℃。。2．5重复性与线性关系考察迁移时间的日内及日问相对标准偏差(RSD)分别为1．7％(

7、n=lO)和2．】％(“=lO)；峰面积的日内及日间RSD分别为4．5％和5．7％。AMP、ADP及ATP的峰面积与浓度在O．125mg／mL～2．0mg／mL范国内有良好的线性关系，相关系数为0．991～O舯7，最低检测限为0．125m94mL(S／N>_3)-将本方法用于生物组织样品中ATP、ADP及AMP含量测定的研究尚有待进一步深入。参考文献：[1]高鸿，余志豪，喻田。等．遵义医学院学报[J]，1997，20：36．[2]陈义，毛细管电泳技术及应用[加．北京：化学工业出版社，2000：16Researchont

8、heSeparationofATP,ADPandAMPbyCapillaryElectrophoresisZHOUChun-xi，YURong，LVHai-yan，LIAOJie(MedicalExperimental&AnalysisCen砖PLdGeneralHospital,Beijin91008531Abstract：Th