冠心病痰瘀证候与ｅ选择素ｇ９８ｔ及ｓ１２８ｒ基因多态性的关系研究

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1、冠心病痰瘀证候与Ｅ选择素Ｇ９８Ｔ及Ｓ１２８Ｒ基因多态性的关系研究：洪永敦，朱会英，陈宇鹏，吴辉，莫鸿辉，黄衍寿，史成军【摘要】【目的】从基因多态性角度探讨冠心病痰瘀证的实质。【方法】入选１０７例研究对象（其中正常组２０例，冠心病组８７例），应用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（ＰＣＲＲＦＬＰ）核苷酸分型技术检测血清E选择素（Eselectin）Ｇ９８Ｔ及Ｓ１２８Ｒ基因型，同时采用酶联免疫吸附法测定血清Eselectin浓度。【结果】冠心病痰瘀证组EselectinＧ９８Ｔ的ＧＧ基因型、Ｇ等位基因，Eselectin　Ｓ１２８Ｒ的ＳＲ基因型、Ｒ等位基因频率高于正常组，但经过统计学

2、分析，两者之间差异无显著性意义（Ｐ＞００５）。冠心病痰瘀证型组患者血清Eselectin水平高于正常组（Ｐ＜００１）。【结论】冠心病痰瘀证可能与Ｅ选择素Ｇ９８Ｔ的Ｇ等位基因、Ｅ选择素Ｓ１２８Ｒ的Ｒ等位基因有一定的相关性。【关键词】冠状动脉疾病；痰证；血瘀；E选择素/血液冠心病是严重影响人类健康生活的疾病之一，炎症在冠心病的形成发展过程中起着重要作用。遗传流行病学研究显示冠心病的发病有遗传因素的作用，目前相继发现一些基因多态性影响脂质代谢、炎症反应、血栓形成及血管收缩与舒张等病理生理过程，与冠心病发生的危险性增加关系密切。痰瘀证候是冠心病的常见证候。本研究采用聚合酶链反应—限制性片段长

3、度多态性方法（ＰＣＲＲＦＬＰ）检测冠心病痰瘀证候患者的血清Ｅ选择素（Eselectin）Ｇ９８Ｔ及Ｓ１２８Ｒ基因型，以期发现其中的内在联系。现将结果报道如下。1研究对象11资料研究对象均于２００６年２月～２００７年３月在广州中医药大学第一附属医院心内科临床确诊为冠心病心绞痛和急性心肌梗死的住院病例（部分病例经冠状动脉造影明确诊断）；同时设立正常组作为对照（正常组为健康志愿者）。所有研究对象均为汉族广东省常住人口。12诊断标准诊断标准参照１９７９年国际心脏病学会及世界卫生组织关于缺血性心脏病的诊断［１］；辨证标准参照中华人民共和国中医药行业标准（１９９４年）《中医病证诊断疗效标准》［

4、２］中的胸痹心痛辨证分型及沈绍功等［３］《中医心病诊断疗效标准与用药规范》。具体中医辨证标准如下：（１）痰浊证组：胸脘闷痛痞满，口黏乏味，纳呆脘胀，苔腻或黄或白滑，脉滑或数。（２）血瘀证组：胸脘刺痛固定，面晦唇青，怔忡不宁，舌质紫暗或见紫斑或舌下脉络紫胀，脉涩或结代。（３）痰瘀证组：胸痛（心前区痛或痛引肩背）或胸脘痞满，舌质紫暗，或有瘀点、瘀斑，舌苔厚腻，脉弦或滑。同时具备以上四大主症者可辨证为痰瘀证。13一般资料入选研究对象共１０７例，其中正常组２０例，男６例，女１４例，平均年龄为（６４１５±１２２２）岁，体质量指数为（２３７６±２９１）kg/m2。冠心病组８７例，其中痰瘀证组

5、５５例，男３８例，女１７例，平均年龄为（６４８７±１２９１）岁，体质量指数为（２４６８±３３３）kg/m2；血瘀证组２０例，男１１例，女９例，平均年龄为（６３３０±１０２６）岁，体质量指数为（２４９４±２５４）kg/m2；痰浊证组１２例，男８例，女４例，平均年龄为（５４７５±１１８６）岁，体质量指数为（２４１８±２８０）kg/m2。各组在年龄、性别、体质量指数方面比较差异无显著性意义（Ｐ＞００５）,具有可比性。2研究方法21标本收集选择血清／全血作为观察样本，病人入院后次日凌晨６时进行采血，标本放置于冰箱，并于当日对所需血清标本进行以3000r/min离心10m

6、in，取上清液，置于-３０℃冰箱保存，全血标本置于-７０℃冰箱保存。22检测指标及方法Eselectin浓度采用酶联免疫吸附法测定（试剂盒由美国RD公司提供），由本院实验中心完成；采用聚合酶链反应—限制片段长度多态性（ＰＣＲＲＦＬＰ）基因分析法检测Eselectin　Ｇ９８Ｔ及Ｓ１２８Ｒ基因型，由中山大学组织配型中心完成。血清Eselectin酶联免疫法测定具体操作方法：（１）血清标本置于室温下解冻；（２）按说明准备试剂、标准品及样本；（３）每孔加入100μL测定稀释液；（４）每孔加入１００μL标准品或已稀释的样本。室温下在振荡机上以（５００±５０）r/min进行振荡，孵育15

7、h；（５）抽吸清洗６次，将微孔在吸水纸上扣干；（６）每孔加入１００μL酶联物，室温下振荡孵育３０min；（７）每孔加入１００μL显色液，室温避光孵育1h；（８）每孔加入５０μL终止液，３０min内在４５0nm处读Ｄ值；（９）以Ｄ值为纵坐标，以标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线。根据血清样品的Ｄ值可在标准曲线上查出其浓度。Ｇ９８Ｔ及Ｓ１２８Ｒ基因多态性的关系研究Eselectin　Ｇ９８Ｔ及Ｓ１２８Ｒ基因型检测的ＰＣＲＲ