海洛因依赖对大鼠垂体β内啡肽表达的影响

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1、海洛因依赖对大鼠垂体β内啡肽表达的影响【摘要】目的：探讨海洛因依赖对大鼠垂体远侧部β内啡肽（βendrophin，βEP）表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠55只，随机分为正常对照组、盐水对照组及海洛因依赖组；皮下注射海洛因建立海洛因依赖大鼠模型，分别于模型建立的第10、17、24、31、38天取垂体组织，应用免疫组织化学SABC法、图像分析法观察大鼠垂体远侧部β内啡肽表达。结果:与正常对照组和盐水对照组比较，海洛因依赖组大鼠垂体远侧部βEP免疫反应明显减弱，平均灰度值增高(P＜0.05)。结论:在海洛因依赖期间，垂体远侧部β

2、EP表达减少，提示海洛因依赖使内源性阿片样物质的产生受到抑制。【关键词】海洛因依赖；β内啡肽；垂体；免疫组织化学；大鼠，SpragueDaechanismofthechanges.Methods:FiftyfivemaleadultSDratslydividedintoanormalcontrolgroup(groupNCG),asalinecontrolgroup(groupSCG)andaheroindependencegroup(groupHDG).Heroindependentratmodelsodelsmunohistoch

3、emicalSABCmethod,imagineanalysis,andradioimmunoassaymunestainingintensityofβEPcellsingroupHGDinishduringheroindependence,Themorphologicalandfunctionalchangessuggestthatheroininhibittheproductionofendogenousopioid.　　［Keymunohistochemistry;rats,Spraguedag/kg，2次/d（上午8时，下午3时

4、）；连续9d至成瘾，第9天剂量为27mg/kg。此后每日仅上午8时皮下注射海洛因1次，剂量27mg/kg，维持至取材。盐水对照组大鼠按体重每日注射与依赖组相同剂量的生理盐水为模拟模型；正常对照组不予任何处理，常规喂养。　　1.2取材和标本制备　　海洛因依赖组及盐水对照组大鼠分别于模型建立的第10、17、24、31、38天取材，每次每组处死5只，处死正常对照组大鼠1只。各组取垂体标本，多聚甲醛液固定，常规石蜡包埋，制成4μm厚的连续切片，切片间隔56μm。　　1.3βEP表达　　用免疫组织化学SABC法显示βEP表达阳性细胞。主要步骤为：

5、切片常规脱蜡至水，10%甲醇-H2O2，正常羊血清（1∶50），滴加1抗（兔抗βEP1∶50，武汉博士德生物技术有限公司），4℃孵育过夜，羊抗兔IgG（1∶100），SABC复合物（1∶100武汉博士德生物技术有限公司），DABH2O2液显色，苏木精复染细胞核。PBS代替特异性抗血清作为方法对照。　　1.4图像分析　　随机选取第10、17、24、31、38天海洛因依赖组与盐水对照组切片，每组每个时间点3例，正常对照组3例，应用BioMias图像分析系统进行检测。在40倍物镜下，每例随机选取5个视野，测βEP阳性细胞的平均灰度值。应用S

6、PSS11.5软件包对所得数据进行统计分析，P<0.05差异具有显著性。　　2.2图像分析　　大鼠海洛因依赖期间垂体βEP阳性细胞平均灰度值如表1所示，海洛因依赖组βEP阳性细胞的平均灰度值明显增高。大鼠海洛因依赖期间垂体βEP阳性反应细胞图像分析和形态计量的结果与同期的形态观察结果基本一致。　　3讨论　　内啡肽是体内产生的具有类似吗啡作用的肽类物质。体内βEP于前阿黑皮素原(POMC)，POMC含有约230个氨基酸，在不同种属稍有差异，其中βEP的31个氨基酸构成了它的C末端。βEP在垂体前叶及中叶中有很高浓度，在下丘脑

7、、杏仁核、丘脑室周核、脑桥-延髓部及导水管周围灰质中亦有很高浓度[6，7]。有研究报道，吗啡成瘾后，大鼠垂体中βEP样免疫活性物质含量减少(P<0.01)[3]，海洛因依赖大鼠下丘脑、中脑中央灰质、垂体和血浆中的βEP的含量均较对照组显著下降(P<0.05或P<0.01)[4]，海洛因依赖者上午8时内啡肽、ACTH和皮质醇均明显降低[8]。本实验采用免疫组织化学和图像分析方法，对垂体βEP阳性细胞进行研究，发现在海洛因依赖期间，大鼠垂体远侧部细胞βEP表达减少。因此认为，海洛因依赖能使βEP的分泌受到抑制。由于β

8、EP有很强的镇痛作用，其效价数十倍于吗啡[9]，故海洛因依赖者较严重的戒断症状之一就是难以忍受的全身性剧痛[8]，推测这与阿片依赖期间，由于外源性阿片物质进入机体，与阿片受体竞