银杏叶提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响

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1、银杏叶提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响【摘要】目的通过药理实验证明，银杏叶提取物对荷瘤小鼠免疫功能的影响，从而说明银杏叶提取物能提高机体的免疫功能。方法通过对荷瘤小鼠胸腺指数、淋巴细胞转移功能、NK细胞活性、TNF活性、IL-2诱生水平等免疫指标的测定，从而得出银杏叶提取物对机体免疫功能的影响。结果证明银杏叶提取物具有增强机体的免疫功能的作用。结论银杏叶提取物可显著提高荷瘤小鼠的淋巴细胞转化功能；低剂量可增强NK细胞活性；可显著增强TNF活性，且具有剂量依赖性；可显著增强IL-2的诱生水平，且具有剂量依赖性【关

2、键词】银杏叶提取物S180细胞血清药理学杀伤细胞天然肿瘤坏死因子白介素2银杏叶为银杏科银杏属植物银杏（GinkgkobilobaL）的叶子。秋季采集，晒干。气微，味微苦。归心、肺经。传统上用于治疗冠心病、心绞痛、高血脂等症。主要化学成分为黄酮类、内酯类化合物。近几年研究报道银杏叶提取物不但具有扩张血管的作用，还有抗炎、镇痛、抗衰老、降血脂、抗肿瘤作用，许多医药学古籍记载了银杏叶具有治疗膀胱肿瘤和消化道肿瘤的作用。民间就有食用银杏叶治疗癌症的做法。本组用荷瘤小鼠做实验，探讨银杏叶提取物对机体免疫功能的影响及其作

3、用机制。1仪器与材料光学显微镜：日本Olympus；高速离心机：日本SAKURA；电磁搅拌机：日本SAKURA；电子天平：沈阳龙腾称量仪器有限公司；CO2孵箱：美国Backtel型号I-1640培养基：美国GIBCO公司；S180细胞：延边大学药学院药理教研室；昆明种小白鼠（体重18～22g，雌雄各半，普通级）：延边大学药学院实验动物中心；新生小牛血清：北京鼎国生物技术有限公司；二甲基亚砜（DMSO）：Sigma公司；刀豆蛋白A（ConA）：Sigma公司；四甲基偶氮唑盐（MTT）：Genviel浸泡过夜，再

4、加热至60℃，温浸5h，倒出提取液，再加入95%乙醇10000ml重复提取一次，然后再用70%乙醇10000ml煮沸一次，保持沸腾约2h，将三次提取所得浸出液合并后减压浓缩，得棕绿色黏稠液状的总浸膏。总浸膏加适量水溶解，分别以石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取。每溶剂萃取4次，每次1000ml。分别得石油醚萃取物0.242kg，氯仿萃取物0.324kg，乙酸乙酯萃取物0.331kg。取乙酸乙酯萃取物溶解后上硅胶柱，以氯仿-甲醇（4∶1）洗脱，分别收集绿色、黄绿色、红色、棕色和褐色五条色带的流份做初步的细胞毒性实验，结

5、果以红色流份的抑制细胞增殖效果最为明显，因此将红色流份作为本实验的有效成分，将其收集于旋转蒸发瓶中蒸干，过滤除菌，备用。22小鼠胸腺指数的测定［1］将小鼠处死，取胸腺称重，计算胸腺指数。23小鼠脾细胞悬液的制备［2］将小鼠处死，取脾脏，研磨，沙网过滤（200目），加入红细胞裂解液，裂解3min，1500r/min离心8min，取出淋巴细胞，生理盐水冲洗2次，作者单位：1134300吉林白山，白山市食品药品检验所2134300吉林白山，白山市中心医院800r/min离心10min，用RPMI-1640培养液

6、调细胞浓度为5×106/ml，37℃5%CO2饱和湿度培养，备用。24淋巴细胞转化功能的测定［2］将制备的小鼠脾细胞悬液用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液调整细胞浓度为5×106/ml，加入于96孔培养板，100μl细胞悬液/孔。加入浓度为2.5μl/ml的ConA，100μl/孔，于37℃5%CO2培养箱内培养48h后，弃上清，每孔加入MTT（5mg/ml）试液10μl，继续培养4h，弃上清，每孔加入DMSO100μl，振荡10min，用酶联免疫检测仪测在570nm处测吸收度。25NK细胞活性

7、的测定［3］采用MTT方法测定，将制备的脾细胞悬液调浓度为3.1×106/ml。取传代两次且生长良好的靶细胞Yac-1，用培养液调浓度为1.4×105/ml，使得效应细胞和靶细胞的比例为25∶1。将两种细胞接种于96孔培养板，每只小鼠脾细胞悬液均设3孔，其中2孔加入效应细胞和靶细胞，各100μl，另1孔为效应细胞对照，加入效应细胞和RPMI-1640（含10%小牛血清）各100μl。整批实验还设3孔靶细胞对照，加入靶细胞和RPMI-1640各100μl。上述各孔于37℃5%CO2条件杀伤4h后，弃上清，每孔加

8、入MTT（5mg/ml）试液10μl，继续培养4h，弃上清，每孔加入DMSO100μl，振荡10min，用酶联免疫检测仪在570nm处测吸收度。26TNF活性测定［4］261TNF的诱生将制备的小鼠脾细胞悬液用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液调整细胞浓度为1×106/ml，接种于24孔培养板，每孔500μl，每孔再加终浓度为5μg/ml的ConA，500μl/孔，37℃5%CO2培养