[经典]浅析原发性肝癌患者前X基因的分子流行病学意义.doc

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1、浅析原发性肝癌患者前X基因的分了流行病学意义【摘要】目的：了解前X基因在HBV相关HCC患者中的流行病学分布、前X基因和HBV基因型与HCC的临床关系•方法：患有乙肝的肝细胞肝癌患者(HCC)35例，采用型特异性引物巢式聚合酶链反应进行基因分型•结果：HCC患者35例屮B基因型1例，C基因型24例，B/C混合基因型8例，未定型者2例.明确基因型的患者：33例，进一步扩增前结论：HCC患者屮C基因型、B/C混合基因熨较为多见.前X多肽在HCC患者屮有较高的编码率，前X区多肽可能和HOCZ间有一定相关性.【关键词】肝

2、炎病毒；乙型基因型前；X基因；癌肝细胞[Abstract]Objective:TounderstandtheformerXgeneinIICCpatientswithIIBV-relatedepidemiologicaldistribution,beforetheXgeneandIIBVgenotypeandclinicalHCC.Methods:PeoplewithhepatitisBpatientswithhepatocellularcareinoma(HCC)35例usingtype-spccificpri

3、mersnestedpolymerasechainreactiongenotyping.ResuIts:HCCin35patientswithgenotype1caseB,Cgenotypeof24pa/tients,B/Cmixedgenotypein8cases,2caseswerenotfinalized.33patientswithgenotypespecific,andfurtheramplifiedbeforetheconclusion:HCCpatientswithgenotypeC,B/Cmixe

4、dgenotypeismoreprevalent.preXpeptidesinHCCpatientshaveahigherencodingrate,theformerXDistrictpeptidesmaybesomecorrelationbetweenHCC.【Keywords]HepatitisBvirusgenotypepreXgenehepatocellularcareinoma乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)在其负链上含4个部分重叠的开放读码框架(openreadingframe,

5、ORF)即前S/S区、前C/C区、P区和X区，分别编码7种性质不同的蛋白如HBcAg,HBeAg,HBsAg等.有研究表明,X区编码的HBxAg与肝细胞肝癌(HCC)的形成密切相关。研究证实，在XORF的上游还存在一个新的ORF即前XORF,而关于其的功能研究锻不多见，是否具有类似功能尚不确定，我们对前XORF功能进行初步探讨.1对象和方法1.1对象200401/200412HBVDNA阳性的HCC患者35例.所有患者均经B超、CT和核磁共振(MRT)或血管造影等临床诊断为乙肝相关性肝癌，采用蛋白酶K、酚氯仿异戊

6、醇法提取血清IIBVDNA.乙肝标志物的测定均采丿I]ELISA法检测，试剂由华美生物T程有限公司提供.生化指标(ALT)由我院全白动生化检测仪常规测定.1.2方法通过比对不同HBV基因型序列以及参考Natio等设计的6种主要基因型的分析方法，设计了共同的外引物Pl,P2,进行PCR扩增，并以扩增产物为模板进行基因型特异性内引物扩增.基因型特异性内引物扩增分为A,B两组，其中A组包括共有的上游引物P3,PA(基因型A特异性下游引物)，PB(基因型B特异性下游引物)，PC(基因型C特异性下游引物)，B纟R包括上游引

7、物P4以及基因型D,E,F的特异性下游引物PD,PE,PF,同时行PCR扩增.取第2轮PCR扩增产物5uL经过20g/L琼脂糖凝胶电泳后判断HBV基因型，根据电泳结果判断HBV基因型.以35例HCC患者屮明确HBV基因分型的33例患者HBVDNA溶液为模板，根据前X上游引物Pxl,下游引物为Px2,扩增前X区.Pxl下游第3133nt处为前X区起始密码了ATG,Px2上游3032nt处为X区起始密码了ATG,扩增的靶区域全长231nt,其屮前X区全长为168nt.将PCR产物

8、叫收并连接至PMD18T载体，将连接

9、好的重组体转入感受态细胞，经氨茉青霉素（Amp）和X飙1蓝白斑法初步筛选阳性菌落，进一步提取质粒采用PCR法鉴定.对经过鉴定的成功导入前X基因的菌落送测序.统计学处理：所有数据应用SPSS13.0统计软件分析，不同纟H.间率的比较采用x2检验,均数比较采用t检验.P<0.05表示有统计学意义.2结果2.1HBV基因型应用该基因型分型方法,A组PCR产物电泳时A基因型为68